[發明專利]球孢白僵菌在玉米苗期的定殖方法及其應用

在審

• 申請號: 201611075543.5
• 申請日: 2016-11-29
• 公開（公告）號: CN106717306A
• 公開（公告）日: 2017-05-31
• 發明（設計）人: 隋麗;徐文靜;李啟云;王永志;路揚;張正坤
• 申請（專利權）人: 吉林省農業科學院
• 主分類號: A01C1/08
• 分類號: A01C1/08;A01G7/06
• 代理公司: 北京超凡志成知識產權代理事務所(普通合伙)11371
• 代理人: 欒波

技術領域

本發明涉及微生物定殖技術領域，具體而言，涉及一種球孢白僵菌在玉米苗期的定殖方法及其應用。

背景技術

寄生在昆蟲、蜘蛛等幼蟲或成蟲上的真菌，稱為蟲生真菌(entomogenous fungi或entomopathogenic fungi)蟲生真菌在保護植物免受病蟲害侵擾方面扮演著重要的角色，是近三十年來在國內外迅速受到關注的微生物類群。蟲生真菌的植物內生性已得到眾多研究者的驗證，該類菌種可以存在于多種野生植株的組織內，如玉米、高粱、番茄、棉花、香蕉、加州山松、可可、罌粟等。此外，也可以通過人工接種的方式將菌種接種到寄主植物當中，主要接種方法有土壤灌溉、種子包衣、浸種、胚根敷料(土壤拌種)、根和根莖浸泡、莖部注射、葉面噴施和花朵噴施等，菌株能從接種部位向周圍組織擴散并定殖在寄主植物組織中，但根據接種方法、接種部位及宿主植物不同，菌種定殖效率也存在一定差異。蟲生真菌在植物中定殖對植物的生長有一定的促進作用，主要表現在增加生物量，提高自身抗性等。但有關蟲生真菌促進植物生長的相關機制報道較少，植物自身生長狀態的改變勢必會帶來植物體內相關防御酶活性的變化，這方面的研究目前未見報道。

有鑒于此，特提出本發明。

發明內容

本發明的目的在于提供一種球孢白僵菌在玉米苗期的定殖方法，利用球孢白僵菌孢子懸液浸種法處理玉米種子，使其在玉米中定殖，其方法簡便易行，本方法明確了最佳的浸種時間，以及球孢白僵菌在玉米苗期的定殖偏好性，同時檢測了該種接種方法對玉米苗期生長狀態的影響，并進一步研究了玉米抗性相關防御酶活性的變化情況，對蟲生真菌促進植物生長的機制進行了初步探討。

為了實現本發明的上述目的，特采用以下技術方案：

一種球孢白僵菌在玉米苗期的定殖方法，包括：

將玉米種子表面消毒后經球孢白僵菌孢子懸液浸種；

所述球孢白僵菌菌株保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號為：CGMCC7192；保藏時間為：2013年01月23日。

本發明使用的菌株為吉林省農業科學院植物保護研究所生物農藥課題組分離保存的球孢白僵菌Beauveria bassiana D1-5菌株。該菌株分離自亞洲玉米螟，2008年采集于吉林省德惠市。

本發明使用的玉米品種為墾粘一號(KN1)。該品種屬于青食玉米，微甜，口感好，是主要的食用品種，在吉林省種植面積居首位。

本發明利用球孢白僵菌孢子懸液浸種法處理玉米種子，使其在玉米中定殖，該種方法簡便易行，旨在明確最佳的浸種時間，以及球孢白僵菌在玉米苗期的定殖偏好性，同時監測了該種接種方法對玉米苗期生長狀態的影響，并進一步研究了玉米抗性相關防御酶活性的變化情況，對蟲生真菌促進植物生長的機制進行了初步探討。

優選的，如上所述的球孢白僵菌在玉米苗期的定殖方法，所述表面消毒的方法為：

用65％～75％乙醇溶液浸泡20s～40s，再使用0.8％～1.2％次氯酸鈉溶液浸泡20s～40s，最后用無菌水清洗2～5次。

優選的，如上所述的球孢白僵菌在玉米苗期的定殖方法，所述球孢白僵菌孢子的濃度為10^8～9個孢子/mL。

優選的，如上所述的球孢白僵菌在玉米苗期的定殖方法，所述玉米種子和所述白僵菌孢子懸液的比例為：

每100粒玉米種子浸泡在15～25mL白僵菌孢子懸液中。

優選的，如上所述的球孢白僵菌在玉米苗期的定殖方法，所述白僵菌孢子懸液的溶劑為0.04％～0.06％的吐溫-80溶液。

優選的，如上所述的球孢白僵菌在玉米苗期的定殖方法，所述浸種的條件為：26℃～30℃，60r/min～100r/min浸種10h～14h。

浸種時間會對苗期幾種防御酶活性產生影響，是關鍵的參數之一。

優選的，如上所述的球孢白僵菌在玉米苗期的定殖方法，將玉米種子表面消毒后經球孢白僵菌孢子懸液浸種后還包括：

將種子鋪于無菌濾紙上，吹干備用。

優選的，如上所述的球孢白僵菌在玉米苗期的定殖方法，所述玉米的品種為墾粘一號。

如上所述的球孢白僵菌在玉米苗期的定殖方法在提高玉米幼苗品質以及防治玉米害蟲中的應用。

優選的，如上所述的應用，所述玉米害蟲包括玉米螟、松毛蟲、小蔗螟、盲椿、谷象、柑桔紅蜘蛛和蚜蟲中的一種或多種。

與現有技術相比，本發明的有益效果為：