[發明專利]快速檢測禽流感和人流感易感人群的方法以及試紙條

有效

• 申請號: 201611073359.7
• 申請日: 2016-11-29
• 公開（公告）號: CN106771120B
• 公開（公告）日: 2018-10-30
• 發明（設計）人: 李錚;肖志強;張甲戌;蘇建英;于漢杰;鐘耀剛;舒健;劉夏薇;危琨;馬恬然;王喜龍
• 申請（專利權）人: 陜西中藥研究所
• 主分類號: G01N33/532
• 分類號: G01N33/532;G01N33/558;G01N33/569;G01N33/68
• 代理公司: 西安通大專利代理有限責任公司 61200
• 代理人: 陸萬壽

本發明公開了一種快速檢測禽流感和人流感易感人群的方法以及試紙條，包括沿層析方向依次設置的樣品墊、金標墊、檢控區以及用于吸收檢測樣品中多余液體的吸水墊；所述檢控區包括依次設置的檢測帶和質控線；所述金標墊包括膠體金標記的凝集素MAL?II或SNA；所述檢測帶包括與凝集素MAL?II不結合的穩定內參凝集素或與凝集素SNA不結合的穩定內參凝集素。將試紙條的樣品墊一端插入唾液樣本中或含在口腔中，10～15分鐘后，將試紙條取出，觀察檢測帶以及質控線顯色狀態，得到檢測結果，本發明真正實現無創、安全、簡便地檢測禽流感和人流感病毒易感人群。

技術領域

本發明涉及基于試紙條技術快速檢測禽流感和人流感病毒易感人群，也可發展為基于酶標板檢測的雙凝集素夾心法快速檢測禽流感和人流感病毒易感人群。

背景技術

凝集素是非免疫來源的、不具有酶活性的一類糖結合蛋白，能專一地識別某一特殊結構的單糖或聚糖中特定的糖鏈序列而與之結合。截至目前已經從自然界中發現100多種植物源的凝集素。凝集素有各種應用：如惡性腫瘤等疾病的診斷、設計抗菌抗病毒藥物、設計“生物導彈”、以及進行糖鏈結構的識別和分析等。隨著將芯片技術引入糖組學研究領域，凝集素作為解碼糖鏈結構的重要工具越來越引人矚目。凝集素芯片根據凝集素和糖鏈之間的特異性相互識別作用，將各種不同來源的凝集素固定于環氧化、醛基化或經其他方式修飾的片基上，再與標記后的糖蛋白、細胞和菌體等待檢測樣本孵育反應，經一系列后續處理后，才能得到待檢測樣本中的糖鏈結構和其識別的凝集素。

流感病毒在自然界中的宿主分布非常廣泛，具有復雜的基因結構，且其基因發生重配和突變的概率很高，因此在全球范圍內呈周期性流行。迄今，在人類歷史上一共爆發了四次大規模的流感流行，包括西班牙大流感(1918年)、亞洲大流感(1957年)、香港大流感(1968年)以及新甲型H1N1流感(21世紀初)，其中在西班牙流感大流行中，死亡人數高達2000-4000萬。流感具有發病率及病死率高、傳播速度快、波及范圍廣等特點，一旦爆發起來，將會對人類造成嚴重的災難。近年來，H5、H7和H9亞型流感病毒以及2009年出現的甲型H1N1流感病毒都引起了較大的疫情，H5N1和H7N9型的一些毒株能直接感染人類，高感染率和低致病力的H9亞型同樣也能由禽類直接傳染給人，雖然這幾個亞型的病毒還沒有引起人類流感大流行，但它們潛在的危害是巨大的。流感病毒血凝素(Hemagglutinin,HA)分子與流感病毒宿主細胞表面唾液酸(SA)α2-3半乳糖(Gal)或SAα2-6Gal糖鏈末端受體的結合，是流感病毒侵染機體的開始。不同流感病毒宿主細胞表面上的糖鏈受體結構是不同的，禽流感病毒HA主要識別和結合末端為SAα2-3Gal的糖鏈受體，而人流感病毒HA主要識別和結合末端為SAα2-6Gal的糖鏈受體。

新的研究報道指出人呼吸道上皮細胞上均有SAα2-6Gal和SAα2-3Gal糖鏈受體的分布，但以SAα2-6Gal糖鏈受體的分布為主；另外，SAα2-6Gal在人氣管和支氣管中呈高密度分布，且隨著支氣管分級的降低而逐漸減少，至肺泡分布最少；而SAα2-3Gal在氣管、支氣管以及細支氣管中僅呈少量分布，其分布以呼吸細支氣管和肺泡為主。人呼吸道上少量SAα2-3Gal的存在是部分H5N1亞型禽流感病毒直接感染人類的最有力證據。

人體唾液由腮腺、下頜下腺、舌下腺和其他一些小腺體分泌，包含核酸、蛋白質、脂類、礦物質和其他小分子物質。另外，唾液中還存在抑制和消滅細菌和病毒的物質。唾液含量和組成上的變化，不管是由口腔局部病變還是機體整體狀況引起的，都可能會造成唾液功能缺陷。研究發現，唾液中除了含有一些唾液基本組成性蛋白質(在不同性別和不同年齡段都幾乎無差別表達的蛋白質或糖蛋白)外，還含有一些可能反應人體身體健康和生理狀況的一些蛋白質，這些蛋白質往往在不同年齡、性別、病理和生理狀況的人群中出現差異性表達。