[發明專利]一種血管緊張素轉化酶抑制肽的提取方法

有效

• 申請號: 201611072322.2
• 申請日: 2016-11-29
• 公開（公告）號: CN106755231B
• 公開（公告）日: 2020-11-24
• 發明（設計）人: 付穎寰;孫美玲;張欽;年益營;馬倩;侯永濤;宋鋮鋮
• 申請（專利權）人: 大連工業大學
• 主分類號: C12P21/06
• 分類號: C12P21/06;C07K1/22
• 代理公司: 大連格智知識產權代理有限公司 21238
• 代理人: 劉琦

本發明提供了一種血管緊張素轉化酶抑制肽的提取方法，具體步驟為：取酶解液凍干粉，溶于硼酸鹽緩沖溶液中；取固定化血管緊張素轉化酶與酶解液溶液混合，30℃恒溫水浴震蕩、抽濾、沖洗干凈，收集固相，得到吸附有血管緊張素轉化酶抑制肽的固定化血管緊張素轉化酶；將吸附有血管緊張素轉化酶抑制肽的固定化血管緊張素轉化酶加入到NaCl溶液中，水浴洗脫血管緊張素轉化酶吸附的抑制肽，收集洗脫液，凍干，獲得血管緊張素轉化酶抑制肽。本發明固定化血管緊張素轉化酶活性高、穩定性好，用于分離純化相應的血管緊張素轉化酶抑制肽具有極好效果，固定化過程簡單，且產品穩定性更好。

技術領域

本發明血管緊張素轉化酶抑制肽的提取技術領域，特別涉及一種應用固定化血管緊張素轉化酶對具有血管緊張素轉化酶抑制活性的原料或其酶解液中血管緊張素轉化酶抑制肽的分離純化。

背景技術

高血壓會改變和損壞大腦、心臟、血管、腎臟以及眼底的結構和功能，引起這些器官的并發疾病從而導致功能的衰竭。高血壓導致的以下幾種并發癥：冠心病、腦血管病、高血壓心腦疾病、慢性腎功能衰竭和動脈粥樣硬化等。目前的降血壓藥物主要有利尿藥、β受體阻滯劑、鈣通道阻滯劑、血管緊張素轉化酶(ACE)抑制劑和血管緊張素Ⅱ受體阻滯劑。

血管緊張素轉換酶(ACE)是一種存在于肺、腎、腦、眼球、小腸、胎盤等不同組織的多功能二肽羧基肽酶。在人體中，血壓的調節主要是受到腎素－血管緊張素系統(Renin-Angiotensin System,RAS)和激肽釋放酶－激肽系統(Kallikrein-Kinin System，KKS)的控制，當其失衡時將會引起人體血壓的異常，而ACE又是這兩個系統的關鍵酶。

目前，治療高血壓的藥物多是人工合成的ACE抑制肽，但是由于其具有明顯的副作用，因此開發無副作用的天然的健康的ACE抑制肽成為時下研究的熱點。

目前，常用超濾，凝膠層析、離子交換層析、反相高效液相色譜以及親和層析等方法分離純化血管緊張素轉化酶抑制肽(ACEIP)。其中親和分離法分離純化蛋白肽是非常高效快捷的方法，而應用固定化酶技術親和分離純化蛋白的方法也迅速發展。應用固定化酶親和分離方法的載體不僅可以達到快速分離純化蛋白肽的目的，同時可以降低成本，且對環境友好。

國內外對血管緊張素轉化酶的固定化研究的報導，多采用殼聚糖、瓊脂糖微球、甲殼糖為固定化載體。將ACE固定到SBA-15上，制備SBA-15未有報道。SBA-15分子篩是采用三嵌段共聚物為模板劑于酸性合成體系中制備出來的介孔材料，孔徑尺寸為4.6～30nm，孔體積可達0.85cm³/g，是目前孔徑最大的分子篩材料。SBA-15介孔分子篩具有孔徑可調、孔壁厚和水熱穩定性高的特點。田志茗等采用無溶劑法將ZnO,(NH₄)₂SO₄與煅燒的主體材料SBA-15分子篩進行人工研磨混合后焙燒，制備了Zn-SO₄^2-/SBA-15改性介孔分子篩。

發明內容

本發明的目的在于應用固定化血管緊張素轉化酶(ACE)對血管緊張素轉化酶抑制肽進行純化分離，制備高純度、無副作用的、天然健康的血管緊張素轉化酶抑制肽。

為達到上述目的，本發明提供了一種血管緊張素轉化酶抑制肽的提取方法，具體步驟為：

S1、取酶解液凍干粉，溶于pH為8.3、0.1mol/L硼酸鹽緩沖溶液，制成濃度為20～100g/L的酶解液溶液；

所述酶解液凍干粉為具有血管緊張素轉化酶抑制活性的原料經蛋白酶水解制得的酶解液，經超濾分級、凍干制得；優選水泡蛾螺酶解液凍干粉；

所述硼酸鹽緩沖溶液中含有濃度為0.1～0.3mol/L的NaCl；