[發明專利]一種反硝化菌的常溫保藏方法

有效

• 申請號: 201611072020.5
• 申請日: 2016-11-29
• 公開（公告）號: CN108117992B
• 公開（公告）日: 2021-05-04
• 發明（設計）人: 孫丹鳳;高會杰;郭志華;趙勝楠;李寶忠;陳明翔
• 申請（專利權）人: 中國石油化工股份有限公司;中國石油化工股份有限公司撫順石油化工研究院
• 主分類號: C12N1/04
• 分類號: C12N1/04
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種反硝化菌的常溫保藏方法，其特征在于包括以下步驟：

（1）將反硝化菌培養并收集菌體；

（2）配制保藏營養液，主要包括碳源、氮源和微量物質；

（3）步驟（1）反硝化菌與步驟（2）保藏營養液于保藏容器中混合，加入適量保藏助劑，所述保藏助劑包括糖脂、糖醇和有機酸鹽；以重量份計，糖脂含量為0.5-15重量份，糖醇含量為0.5-15重量份，有機酸鹽為5-30重量份；

（4）將步驟（3）混合液密封培養4-12h，常溫保藏；常溫保藏溫度為-10℃～30℃。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：保藏助劑中，所述糖脂為海藻糖脂、槐糖脂和鼠李糖脂中的至少一種；糖醇選自甘露醇、木糖醇、乳糖醇、核糖醇、半乳糖醇、肌醇和赤蘚醇中的一種或幾種；有機酸鹽為乙酸鈉、琥珀酸鈉和檸檬酸鈉中的一種或幾種。

3.根據權利要求2所述的方法，其特征在于：保藏助劑中，糖脂為內酯型槐糖脂，糖醇為乳糖醇，有機酸鹽為乙酸鈉。

4.根據權利要求1或2所述的方法，其特征在于：保藏助劑的使用量按照保藏體系中保藏劑濃度為0.01-3.0mg/L進行投加。

5.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：步驟（1）的反硝化菌培養采用SBR法，培養液采用人工配制的培養液或者實際廢水，培養液所含氮源為硝酸鹽氮和/或亞硝酸鹽氮，氮源濃度為100～800mg/L；所含碳源為甘油或甲醇，濃度以COD計為1000～5000mg/L，還含有少量Fe²⁺、Mg²⁺、K⁺、Ca²⁺以及磷酸根離子。

6.根據權利要求1或5所述的方法，其特征在于：步驟（1）反硝化菌培養條件為：溫度15～40℃，pH為7.0～8.5，溶解氧濃度低于1mg/L，攪拌轉速10～50rpm，培養1～5天至對數生長期。

7.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：步驟（2）保藏營養液中碳源為甘油，氮源為硝酸鹽氮和/或亞硝酸鹽氮，硝酸鹽為NaNO₃和/或KNO₃，亞硝酸鹽為NaNO₂，微量物質為FeSO₄、KH₂PO₄、MgCl₂和CaCl₂。

8.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：步驟（3）反硝化菌與保藏營養液混合物中，甘油濃度以COD 計為0.5～3.0g/L，NO₃^--N和/或NO₂^--N濃度為 0.2～0.8g/L，Fe²⁺濃度為0.01～0.06g/L，K⁺濃度為0.05～0.5g/L，Ca²⁺濃度為0.01 ～0.1g/L，Mg²⁺濃度為0.05～0.5g/L。