[發明專利]乳酸乳球菌乳亞種YF11的非編碼小RNA s013

有效

• 申請號: 201611071306.1
• 申請日: 2016-11-29
• 公開（公告）號: CN107043772B
• 公開（公告）日: 2020-09-15
• 發明（設計）人: 喬建軍;趙秀麗;周丹丹;吳昊;財音青格樂;李艷妮;朱宏吉
• 申請（專利權）人: 天津大學
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;C12N15/63;C12N1/21;C12P21/00;C12R1/46
• 代理公司: 天津市北洋有限責任專利代理事務所 12201
• 代理人: 陸藝

本發明公開了一種乳酸乳球菌乳亞種YF11的非編碼小RNA s013，乳酸乳球菌YF11的非編碼小RNA s013，其核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO.1所示；實驗結果表明：乳酸乳球菌乳亞種YF11的非編碼小RNA s013過表達后，含有s013過表達的乳酸乳球菌在酸性環境下的生存能力明顯增強，提高在酸性發酵液的存活率，增加nisin的穩定性，從而提高nisin產量。

技術領域

本發明涉及細菌非編碼小RNA(small non-coding RNA,sRNA),特別是涉及一個乳酸乳球菌乳亞種YF11的非編碼小RNA s013、含有乳酸乳球菌乳亞種YF11的非編碼小RNAs013的載體、含該載體的重組乳酸乳球菌及應用。

背景技術

細菌非編碼小RNA(small non-coding RNA,sRNA)是近年來在細菌等原核生物中發現的一類RNA調控因子，他們不編碼蛋白，通常位于基因間區，長度在50～500個核苷酸之間，是在生物體整個生命過程中十分關鍵的基因調節因子。細菌sRNA是細菌代謝、毒力和適應環境壓力的重要調節因子，在應對環境變化的基因表達調控中發揮重要作用。sRNA主要通在轉錄后過與mRNA相互作用發揮調控功能，。迄今為止，大部分細菌sRNA的研究集中在大腸桿菌等模式生物，但隨著研究的深入，已有越來越多的研究轉向致病菌，如霍亂弧菌、產單核細胞李斯特菌、銅綠假單胞菌、結核桿菌、沙門氏菌、肺炎鏈球菌和金黃色葡萄球菌等，在這些病原體中，已經正式sRNA在轉錄后水平調控基因的表達，并在壓力應答和毒力調控中發揮重要作用。挖掘乳酸乳球菌的sRNA，對sRNA在環境壓力下的調控機制進行分析，可更好地提高菌株某方面的耐受力或增加產物產量。sRNA幾乎不會增加菌株的代謝負擔，而且不會影響正常的生長和生產過程，同時可以有效地調節菌株基因的表達，進而提高菌株的耐受性，在構建工程菌株方面具有重要的意義。

Nisin(乳鏈菌肽)是由一些乳酸乳球菌在代謝過程中合成和分泌的具有較強抑菌作用的分子小肽，對于大多數革蘭氏陽性菌具有抑菌效果，與化學合成防腐劑相比更是具有高效、安全、無毒、無副作用的優點。Nisin生產的困境在于乳酸乳球菌在發酵過程中，菌體生長的最適環境與nisin穩定的pH之間存在矛盾。乳酸乳球菌在pH中性環境下生長勢頭良好，但隨著發酵時間的延長，自身代謝的乳酸使發酵液的pH持續降低，抑制菌體的生長，而且乳酸大量積累本身還會抑制nisin的合成；而nisin則在pH2.0條件下非常穩定，隨著pH值的升高，穩定性越差，活性越低。故通過篩選出耐酸相關sRNA構建耐酸菌株使其在低pH下正常生長生產具有很好的工業價值和研究意義。

發明內容

本發明的目的是克服現有技術的不足，提供一種乳酸乳球菌乳亞種YF11的非編碼小RNA s013。

本發明的第二個目的是提供一種含有乳酸乳球菌乳亞種YF11的非編碼小RNAs013的載體。

本發明的第三個目的是提供一種含有上述載體的重組乳酸乳球菌。

本發明的第四個目的是提供一種含有上述載體的重組乳酸乳球菌在發酵生產乳鏈菌肽的應用。

本發明的技術方案概述如下：

乳酸乳球菌乳亞種YF11的非編碼小RNA s013，該核苷酸序列如序列表中SEQ IDNO.1所示；或與序列表SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列具有90％以上同源性并與耐酸相關的核苷酸序列。

含有乳酸乳球菌乳亞種YF11的非編碼小RNA s013的載體，其核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO.2所示。

含有上述載體的重組乳酸乳球菌。

上述重組乳酸乳球菌在發酵生產乳鏈菌肽的應用。

本發明優點：