[發(fā)明專利]特異性順式作用元件及含該順式作用元件的啟動子和核酸構建體及其應用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201611066844.1
• 申請日: 2016-11-25
• 公開（公告）號: CN106754915B
• 公開（公告）日: 2019-07-26
• 發(fā)明（設計）人: 咸洪泉;張磊;李雅華;杜明珠
• 申請（專利權）人: 青島農業(yè)大學
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;C12N15/11;C12N15/10;C12N15/80;C12N15/82
• 代理公司: 青島鼎丞智佳知識產權代理事務所(普通合伙) 37277
• 代理人: 韓耀朋

本發(fā)明屬于分子生物學技術領域，具體涉及幾丁質特異誘導表達啟動子Ptchi2的序列、順式作用元件的序列“ACTTGTTCA”及其應用。從棘孢木霉TD3104(CGMCC No.13161)中克隆得到內切幾丁質酶基因Tachi2的啟動子Ptchi2，其核苷酸序列如SEQ ID No:1所示，該啟動子包括啟動子核心序列和響應幾丁質誘導的順式作用元件；具有被幾丁質特異誘導、不受葡萄糖抑制的特性。本發(fā)明利用啟動子Ptchi2構建不同的重組載體或重組菌或表達盒，分析了Ptchi2的啟動子活性，利用缺失突變研究了啟動子核心序列和響應幾丁質誘導的順式作用元件，為其在真菌和植物基因的表達調控、植物抗病、蟲基因工程中的應用提供理論依據。

技術領域

本發(fā)明屬于分子生物學技術領域，具體涉及幾丁質特異誘導表達啟動子Ptchi2和特異性順式作用元件及其應用。

背景技術

基因表達調控是基因工程研究的中心內容之一，轉錄水平的調控發(fā)生在基因表達的初期，是基因表達調控的主要方式，啟動子則是基因轉錄水平表達調控的重要和關鍵元件，在基因的調控方面起著決定性作用。誘導型啟動子靈活的表達調控方式賦予了生物更強的適應環(huán)境變化能力和廣闊的開發(fā)利用前景。利用誘導型啟動子代替組成型啟動子，已成為實現基因表達調控的一個重要策略，并應用于酵母的外源基因表達調控、植物抗逆和抗病蟲基因工程領域。如典型的巴斯德畢赤酵母表達系統(tǒng)，利用的是醇氧化酶-1(AOX1)基因的啟動子，誘導物為甲醇，目前已廣泛應用于異源蛋白的表達調控，但是甲醇有毒易燃，應用受到一定的限制；hsr203J為來源于煙草的病原誘導型啟動子，轉基因煙草中由hsr203J驅動的popA基因提供了對卵菌病原體的高度抗性，擬南芥逆境脅迫誘導表達基因rd29A啟動子在轉基因小麥中可以調控小麥的耐旱、耐寒性等等。除了直接利用全長啟動子驅動基因的表達外，利用已知的誘導順式調控元件組合進行基因表達調控已成為一個重要策略，具有良好的應用前景。

一個理想的誘導表達啟動子應具有高效誘導性、特異性和誘導物的安全性，但是目前比較理想、能應用于實際生產的誘導型啟動子還很少。幾丁質作為幾丁質誘導啟動子的誘導物，不僅安全、經濟，而且也是主要植物病原真菌細胞壁的重要成分，在基因表達調控和誘導植物抗病性方面發(fā)揮重要作用，具有重要的研究應用價值。

發(fā)明內容

本發(fā)明的目的在于提供了啟動子Ptchi2的全序列、核心序列、響應幾丁質誘導的順式作用元件及其應用，啟動子Ptchi2為內切幾丁質酶基因Tachi2的啟動子，是從棘孢木霉TD3104(保藏于：中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，地址：北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號，保藏編號：CGMCC No.13161)中克隆得到的，該啟動子為誘導型啟動子，具有被幾丁質特異誘導、不受葡萄糖抑制的獨特誘導啟動特性。

本發(fā)明的技術方案為：

一種啟動子，所述啟動子含有選自以下任一組并具有啟動子功能的核苷酸序列；

a、SEQ ID No:1所示的核苷酸序列；

b、與SEQ ID No:1互補的核苷酸序列；

c、在高等嚴緊條件下能夠與上述a或b的核苷酸序列雜交的核苷酸序列；

d、對上述a或b所示核苷酸序列進行一個或多個堿基的取代、缺失、添加修飾的核苷酸序列；

e、與上述a或b所示核苷酸序列具有至少90％同一性的核苷酸序列。