[發明專利]一種基于微流控芯片的人Y-STR基因位點分型方法

有效

• 申請號: 201611065191.5
• 申請日: 2016-11-28
• 公開（公告）號: CN108118088B
• 公開（公告）日: 2021-08-27
• 發明（設計）人: 秦建華;蘇文濤;姜雷;李艷峰
• 申請（專利權）人: 中國科學院大連化學物理研究所
• 主分類號: C12Q1/6858
• 分類號: C12Q1/6858
• 代理公司: 沈陽晨創科技專利代理有限責任公司 21001
• 代理人: 鄭虹

1.一種基于微流控芯片的Y染色體STR位點分型方法，其特征在于：包括下列步驟：

(1) 選擇電泳體系：進樣緩沖液體系由50mmol/L三羥甲基氨基甲烷、50mmol/L N-三(羥甲基)甲基-3-氨基丙烷磺酸、1mmmol/L乙二胺四乙酸組成1×TTE緩沖液，pH8.3 ；樣本分離體系由POP 4 或 POP 7膠組成；

(2) 選擇電泳芯片：芯片包括樣品池、樣品廢液池、緩沖液池、緩沖液廢液池及十字管道；所述十字管道的橫臂左右兩端分別向垂直于縱臂方向延伸，并分別與緩沖液廢液池及緩沖液池相通，十字管道的縱臂上端與樣品池相通，十字管道的縱臂下端與通過U形延伸段后與樣品廢液池相通；在十字管道的交叉處與緩沖液廢液池之間的橫臂上設置檢測點；

（3）芯片表面修飾：首先將芯片置于真空干燥器中抽真空10分鐘；取出芯片，立即向芯片通道中加入1M NaOH 65℃保持15min，抽干NaOH，加入1M HCl，室溫保持15 min，抽干后加入0.25% 聚N-羥乙基丙烯酰胺（pHEA），室溫保持 1小時，最后以乙腈抽干微通道置于室溫備用；

(4) Y染色體STR位點選擇:選擇五個Y染色體基因座位點分別是DYS459、DYS446、DYS443、DYS460和Y-GATA-A10；5個基因座分成兩組，用HEX標記DYS459、DYS446和DYS443，用TAMRA標記DYS460和Y-GATA-A10，分子量內標用第三色熒光染料ROX標記，組成5個Y染色體STR基因座復合擴增體系；

(5) 電泳：用1×TTE緩沖液浸洗2 分鐘；樣品廢液池、緩沖液池和緩沖液廢液池加入緩沖液后，樣品池中注入待測樣本；樣品廢液池、緩沖液池和緩沖液廢液池加入緩沖液后，樣品池中注入待測樣本；進樣階段，樣品池0V，樣品廢液池+800V，緩沖液池+200V，緩沖液廢液池+700V，進樣10 秒后切換電壓進入分離階段；分離時，緩沖液廢液池+3600V，緩沖液池0V，樣品池和樣品廢液池均施加+900V，運行溫度為25℃；得到五個Y染色體基因座位點的出峰時間。

2. 根據權利要求1 所述的一種基于微流控芯片的Y染色體STR位點分型方法，其特征在于：所述芯片大小為63mm×30mm，芯片管道寬90μm，深30μm，芯片樣品池到十字交叉點長5mm，有效分離長度為160mm，樣品池、樣品廢液池、緩沖液池和緩沖液廢液池的直徑均為2mm。