[發明專利]一種蠶豆SSR指紋圖譜的構建方法

有效

• 申請號: 201611062135.6
• 申請日: 2016-11-25
• 公開（公告）號: CN106755328B
• 公開（公告）日: 2020-02-11
• 發明（設計）人: 宗緒曉;張紅巖;楊濤;劉榮
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院作物科學研究所
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12Q1/6858;C12N15/11
• 代理公司: 11002 北京路浩知識產權代理有限公司
• 代理人: 王文君

1.一種用于鑒別蠶豆品種的分子標記組合，其特征在于，由15個SSR分子標記和6個EST-SSR分子標記組成，分別為SSR11908、EST181、SSR11771、SSR12080、SSR13683、SSR12396、SSR14328、EST1672、EST1280、EST1741、SSR17991、SSR10911、SSR13106、SSR760、EST1142、SSR11052、SSR13771、SSR11885、SSR12536、SSR12868、EST1584；

所述分子標記分別通過以下引物對擴增得到：SEQ ID NO.1-2、SEQ ID NO.3-4、SEQ IDNO.5-6、SEQ ID NO.7-8、SEQ ID NO.9-10、SEQ ID NO.11-12、SEQ ID NO.13-14、SEQ IDNO.15-16、SEQ ID NO.17-18、SEQ ID NO.19-20、SEQ ID NO.21-22、SEQ ID NO.23-24、SEQID NO.25-26、SEQ ID NO.27-28、SEQ ID NO.29-30、SEQ ID NO.31-32、SEQ ID NO.33-34、SEQ ID NO.35-36、SEQ ID NO.37-38、SEQ ID NO.39-40、SEQ ID NO.41-42所示的引物對。

2.一種引物組合，其特征在于，由以下21對特異性引物對組成，其為SEQ ID NO.1-2、SEQ ID NO.3-4、SEQ ID NO.5-6、SEQ ID NO.7-8、SEQ ID NO.9-10、SEQ ID NO.11-12、SEQID NO.13-14、SEQ ID NO.15-16、SEQ ID NO.17-18、SEQ ID NO.19-20、SEQ ID NO.21-22、SEQ ID NO.23-24、SEQ ID NO.25-26、SEQ ID NO.27-28、SEQ ID NO.29-30、SEQ ID NO.31-32、SEQ ID NO.33-34、SEQ ID NO.35-36、SEQ ID NO.37-38、SEQ ID NO.39-40、SEQ IDNO.41-42所示的引物對。

3.含有權利要求1所述分子標記組合或權利要求2所述引物組合的試劑盒。

4.權利要求1所述的分子標記組合或權利要求2所述的引物組合在鑒定蠶豆品種中的應用。

5.權利要求1所述的分子標記組合或權利要求2所述的引物組合在蠶豆種質資源改良中的應用。

6.一種蠶豆品種SSR指紋圖譜的構建方法，其特征在于，以權利要求2所述的引物組合對不同蠶豆品種的DNA進行PCR擴增，對PCR產物進行非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳進行檢測或對PCR產物進行熒光毛細管電泳檢測，

純合位點的等位變異大小數據記錄為X/X，其中X為該位點等位變異的大小；

雜合位點的等位變異數據記錄為X/Y，其中X、Y為該位點上兩個不同的等位變異；

無效等位變異的大小記錄為0/0；

上述“/”前為小片段，“/”后為大片段；

通過對不同位點的數據整合，形成不同蠶豆品種的SSR指紋圖譜。

7.如權利要求6所述的構建方法，其特征在于，PCR擴增方法為：

反應程序為：95℃預變性5min；95℃變性35s，60℃退火40s，72℃延伸45s，共32個循環；72℃延伸5min，10℃保溫5min；

10μL擴增體系為：2×Taq PCR Master Mix5μL，2μM/μL的上、下游引物各1μL，DNA模板1.5μL，ddH₂O 2.5μL。

8.權利要求6或7所述的構建方法構建得到的蠶豆品種指紋圖譜在鑒別蠶豆品系或其野生近緣種中的應用，或在蠶豆種質資源改良中的應用。