[發明專利]一種基于液滴微流控芯片的高通量自動捕獲單細胞的方法

在審

• 申請號: 201611061683.7
• 申請日: 2016-11-28
• 公開（公告）號: CN108117968A
• 公開（公告）日: 2018-06-05
• 發明（設計）人: 秦建華;張曉慶;姜雷;蘇文濤
• 申請（專利權）人: 中國科學院大連化學物理研究所
• 主分類號: C12M1/00
• 分類號: C12M1/00;C12N5/00
• 代理公司: 沈陽晨創科技專利代理有限責任公司 21001
• 代理人: 鄭虹

1.一種液滴微流控芯片，其特征在于所述芯片由兩層組成，上層為流路出入口層；下層為流路控制層；

所述流路出入口層有液體流路通道入口(1)和液體流路通道出口(2)；

所述流路控制層由單細胞捕獲流路通道(3)、氣路通道(4)、液滴生成單元(5)組成；

所述單細胞捕獲流路通道(3)是一條由多個交互連接的U型通道構成的長通道，長通道兩端分別連接液體流路通道入口(1)和液體流路通道出口(2)，每個U型通道的直通道均有與之平行的氣體流路通道(4)，每個U型通道的直通道上分布著數個圓柱形凹陷小坑結構的液滴生成單元(5)。

2.按照權利要求1所述一種液滴微流控芯片，其特征在于：所述單細胞捕獲流路通道寬100～300μm，U型通道的直通道長為40～50mm，直通道間距為0.5～1mm。

3.按照權利要求1所述液滴微流控芯片，其特征在于：所述氣路通道寬為200～500μm，長為40～50mm，間距為0.5～1mm。

4.按照權利要求1所述液滴微流控芯片，其特征在于：所述單細胞捕獲流路通道與氣路通道間距為0.5～1.5mm。

5.按照權利要求1所述液滴微流控芯片，其特征在于：所述液滴生成單元為圓柱形凹陷小坑結構，共有6000～10000個，小坑直徑為15～45μm，高80～200μm，小坑間距80～150μm。

6.按照權利要求1所述一種基于液滴微流控芯片的高通量自動捕獲單細胞的方法，其特征在于采用上述液滴微流控芯片，按照以下步驟進行：

將上述制備的微流控芯片經60～90％乙醇浸泡，紫外照射30～60min滅菌處理后，將液體流路通道出口堵住，置于真空培養箱抽真空5～10min，隨后，快速將單細胞懸液以5×10³cells/mL～5×10⁶cells/mL的細胞密度加入芯片入口，控制單細胞懸液流速在0.01m/s～0.05m/s之間，待全部液滴生成單元都充滿單細胞懸液時，打開液體流路通道出口，將液體流路通道中多余液體排除，待細胞粘附于芯片底面，補加新鮮的高糖DMEM培養基，置于37℃培養箱培養。

7.按照權利要求6所述一種基于液滴微流控芯片的高通量自動捕獲單細胞的方法的應用，其特征在于：所捕獲的單細胞可在芯片的液滴結構中長期培養，并可應用于細胞增殖、分化以及藥物篩選等方面。