[發明專利]一種滇楸與梓樹的試管苗微型嫁接方法

在審

• 申請號: 201611061258.8
• 申請日: 2016-11-28
• 公開（公告）號: CN106718883A
• 公開（公告）日: 2017-05-31
• 發明（設計）人: 杜克兵;張燁然;張新葉;李振芳;陳慧玲;楊杉
• 申請（專利權）人: 華中農業大學;湖北省林業科學研究院
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00;A01G1/06
• 代理公司: 北京精金石專利代理事務所(普通合伙)11470
• 代理人: 強紅剛

1.一種滇楸與梓樹的組培苗微型嫁接方法，其特征在于，該方法包含下述步驟：

(1)接穗培育：于6～9月采集長勢良好的滇楸1年生嫩枝進行初代培養、增殖培養和壯苗培養，獲得大量莖段伸長、直徑變粗的組培苗，備用；

(2)砧木培育：于6～9月采集長勢良好的梓樹1年生嫩枝進行初代培養、增殖培養和壯苗培養，獲得大量莖段伸長、直徑變粗的組培苗，備用；

(3)嫁接：

①接穗處理：壯苗培養35～45d，選取生長旺盛、直徑1.5～2mm、高≥4.0cm的滇楸組培苗，于無菌環境下切取其形態學上端1.8～2.2cm的莖段，產生斜切長度0.5～0.6cm的平滑切面，保留3～4個芽及頂部1～2片幼葉；

②砧木處理：壯苗培養35～45d，選取生長旺盛、直徑1.5～2mm、高≥4.0cm的梓樹組培苗，于無菌環境下切除其莖頂、所有葉片及根部或底部愈傷組織，保留長2～3cm的主莖部分作為砧木，抹除主莖上的芽，然后將砧木形態學上端斜切，產生長度0.5～0.6cm的平滑切面；

③無菌微型嫁接：在無菌環境下，將切好的接穗和砧木放入滅菌的透明管內，接穗和砧木的切口緊密接觸，使形成層對齊，并在透明管內固定；整個嫁接過程保持無菌操作，最后將完成的嫁接苗插入生根培養基中，于培養室內培養；

(4)嫁接苗移栽：將育苗基質土分裝于花盆內，保持基質土松散、透水、透氣；嫁接40～45d左右，培養基內嫁接苗切口完全愈合，苗成功生根，根系長度≥1cm，且接穗正常生長發育，有萌芽現象出現時，進行無菌嫁接苗移栽；移栽時，洗凈嫁接苗根部附著的培養基，保持莖段直立將苗根部種植于基質土內，覆土深1.5～2.5cm，澆透水，并覆蓋透明塑料杯；

(5)移栽后管理：將移栽苗置于濕度70％～80％、溫度(25±2)℃的條件下培養，光照時間15～17h.d^-1，期間不需要澆水；待15～20d后移除塑料杯，并移除嫁接苗莖段上的透明管，任其自然生長，隨后進行苗木常規管理。

2.根據權利要求1所述滇楸與梓樹的組培苗微型嫁接方法，其特征在于，步驟(3)中所述的透明管為透明硅膠管。

3.根據權利要求2所述滇楸與梓樹的組培苗微型嫁接方法，其特征在于，所述的透明硅膠管的內徑2.0～2.5mm，外徑4.0～4.5mm。

4.根據權利要求1所述滇楸與梓樹的組培苗微型嫁接方法，其特征在于，所述的透明硅膠管的內徑2.0mm，外徑4.0mm。

5.根據權利要求1所述滇楸與梓樹的組培苗微型嫁接方法，其特征在于，步驟(1)和(2)的初代培養基配制方法為：以DKW為基本培養基，添加2.5％蔗糖+0.8％瓊脂+1.0g﹒L^-1活性炭+1.0mg﹒L^-16-BA+0.1mg﹒L^-1IBA，調節pH至5.8～6.0，滅菌；

步驟(1)和(2)的增殖培養基配制方法為：以DKW為基本培養基，添加2.5％蔗糖+0.6％瓊脂+3.0mg﹒L^-16-BA+0.2mg﹒L^-1IBA，調節pH至5.8～6.0，滅菌；

步驟(1)和(2)的壯苗培養基配制方法為：以DKW為基本培養基，添加2.5％蔗糖+0.8％瓊脂+1.0mg﹒L^-16-BA+0.1mg﹒L^-1IBA，調節pH至5.8～6.0，滅菌；

步驟(3)的生根培養基配制方法為：DKW為基本培養基，添加2.5％蔗糖+0.8％瓊脂+0.2mg﹒L^-1NAA+0.1mg﹒L^-1IBA，調節pH至5.8～6.0，滅菌。

6.根據權利要求2所述滇楸與梓樹的組培苗微型嫁接方法，其特征在于，步驟(3)的透明硅膠管的滅菌方法為：將透明硅膠管剪成長度1.0～1.5cm的短管，放入封口瓶內，于121℃、1.1kg﹒cm²滅菌鍋中滅菌15～20min。

7.根據權利要求2所述滇楸與梓樹的組培苗微型嫁接方法，其特征在于，步驟(3)的嫁接苗插入生根培養基中時，要求砧木插入培養基深0.8～1.2cm，保持透明硅膠管不接觸培養基。