[發(fā)明專利]一種穩(wěn)定同位素標(biāo)記手性磷試劑及其制備方法與應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201611054073.4
• 申請(qǐng)日: 2016-11-25
• 公開（公告）號(hào): CN106749402B
• 公開（公告）日: 2019-03-15
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 高祥;許鵬翔;張珊珊;趙玉芬
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 廈門大學(xué)
• 主分類號(hào): C07F9/572
• 分類號(hào): C07F9/572;C07F9/6521;G01N30/02;G01N24/08;G01N33/68;G01N27/62
• 代理公司: 廈門南強(qiáng)之路專利事務(wù)所(普通合伙) 35200
• 代理人: 馬應(yīng)森

一種穩(wěn)定同位素標(biāo)記手性磷試劑及其制備方法與應(yīng)用，涉及手性磷試劑。制備方法：步驟1：穩(wěn)定同位素標(biāo)記的醇1的制備；步驟2：穩(wěn)定同位素標(biāo)記的亞磷酸酯2的制備；步驟3：穩(wěn)定同位素標(biāo)記的N?磷酰化氨基酸3的制備；步驟4：穩(wěn)定同位素標(biāo)記N?磷酰化氨基酸活化酯4的制備。所述穩(wěn)定同位素標(biāo)記手性磷試劑在對(duì)含有氨基手性化合物的手性比例進(jìn)行定量分析；對(duì)含有氨基代謝物，如氨基酸、小肽或多肽等進(jìn)行穩(wěn)定同位素磷試劑標(biāo)記定量質(zhì)譜分析；對(duì)生物樣品中含有氨基的代謝物進(jìn)行定量質(zhì)譜分析中的應(yīng)用。反應(yīng)時(shí)間短，標(biāo)記具有高效和高選擇性，樣品處理步驟簡(jiǎn)單。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及手性磷試劑，尤其是涉及一種穩(wěn)定同位素標(biāo)記手性磷試劑及其制備方法與應(yīng)用。

背景技術(shù)

穩(wěn)定同位素化學(xué)標(biāo)記策略與質(zhì)譜技術(shù)聯(lián)用在小分子代謝物和蛋白生物大分子的定性和定量中發(fā)揮著越來越重要的作用，特別是在疾病生物標(biāo)志物的發(fā)現(xiàn)方面。多種基于質(zhì)譜的穩(wěn)定同位素化學(xué)標(biāo)記方法及試劑得到廣泛開發(fā)，如還原甲基化標(biāo)記、丙酮標(biāo)記、和丹磺酰氯標(biāo)記等。[1-3]N-磷酰化氨基酸作為“核酸與蛋白共起源”小分子模型可以發(fā)生自組裝成肽、成酯、磷上酯交換及磷酰基轉(zhuǎn)位等仿生化反應(yīng)。近年來，磷酰化標(biāo)記策略被應(yīng)用于氨基酸、多肽及蛋白質(zhì)的定性與定量質(zhì)譜分析。[4,5]磷酰化標(biāo)記不但可以提高質(zhì)譜分析靈敏度，同時(shí)有利于色譜分離，特別是針對(duì)微量復(fù)雜成分的色譜-質(zhì)譜聯(lián)用分析。本研究基于N-磷酰化氨基酸獨(dú)特的物理化學(xué)性質(zhì)，合成了一系列穩(wěn)定同位素標(biāo)記N-磷酰化氨基酸活化酯，并基于質(zhì)譜對(duì)含有氨基的小分子代謝物和多肽進(jìn)行了定量分析。同時(shí)，通過N-磷酰化氨基酸標(biāo)記，建立了手性化合物分離新策略，基于普通反相色譜柱對(duì)手性胺、手性醇及手性小肽等代謝物及手性藥物進(jìn)行了成功分離與分析。

參考文獻(xiàn)：

1.Guo,K.；Ji,C.J.；Li,L.Stable-isotope dimethylation labeling combinedwith LC-ESI MS for quantification of amine-containing metabolites inbiological samples.Anal.Chem.2007,79,8631-8638.

2.Li,S.F.；Jin,Y.B.；Tang,Z.；Lin,S.H.；Liu,H.X.；Jiang,Y.Y.；Cai,Z.W.Anovel method of liquid chromatography-tandem mass spectrometry combined withchemical derivatization for the determination of ribonucleosides inurine.Anal.Chim.Acta 2015,864,30-38.

3.Zhou,R.K.；Guo,K.；Li,L.5-Diethylamino-naphthalene-1-sulfonylchloride(DensCl):A novel triplex isotope labeling reagents for quantitativemetabolome analysis by liquid chromatography massspectrometry.Anal.Chem.2013,85,11532-11539.

4.Gao,X.；Wu,H.Z.；Lee,K.C.；Liu,H.X.；Zhao,Y.F.；Cai,Z.W.；Jiang,Y.Y.Stable isotope N-phosphorylation labeling for peptide de novo sequencingand protein quantification based on organic phosphoruschemistry.Anal.Chem.2012,84,10236-10244.