[發(fā)明專利]用于DNA檢測(cè)的熒光復(fù)合納米粒子的制備及檢測(cè)方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201611053566.6
• 申請(qǐng)日: 2016-11-24
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN106770088B
• 公開(kāi)（公告）日: 2019-06-11
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李立東;王曉瑜;劉錄;朱書(shū)賢
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 北京科技大學(xué)
• 主分類號(hào): G01N21/64
• 分類號(hào): G01N21/64
• 代理公司: 北京金智普華知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11401
• 代理人: 皋吉甫

1.一種用于DNA檢測(cè)的熒光復(fù)合納米粒子的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

步驟一、將側(cè)鏈修飾有堿基的共軛寡聚物溶于有機(jī)溶劑中，得到溶液A；將染料標(biāo)記的寡核苷酸序列溶于超純水中，得到溶液B；

步驟二、將溶液A快速注入溶液B，混合均勻，用過(guò)濾膜過(guò)濾即得到含有熒光復(fù)合納米粒子的溶液C；

步驟一中，所述側(cè)鏈修飾有堿基的共軛寡聚物選自具有式(1)-(4)的熒光共軛寡聚物中的一種或多種：

2.如權(quán)利要求1所述的用于DNA檢測(cè)的熒光復(fù)合納米粒子的制備方法，其特征在于，步驟一中，所述有機(jī)溶劑為四氫呋喃、甲醇、丙酮、二甲基亞砜、二甲基甲酰胺的一種或多種。

3.如權(quán)利要求1所述的用于DNA檢測(cè)的熒光復(fù)合納米粒子的制備方法，其特征在于，步驟一中，用于標(biāo)記所述寡核苷酸序列的染料為Rhodamine B,Texas Red，X-rhodamine,Naphthofluorescein,Cy3，Cy3.5，Cy5中的一種。

4.如權(quán)利要求1所述的用于DNA檢測(cè)的熒光復(fù)合納米粒子的制備方法，其特征在于，步驟一中，所述染料標(biāo)記的寡核苷酸序列堿基數(shù)目為5-10個(gè)。

5.如權(quán)利要求1所述的用于DNA檢測(cè)的熒光復(fù)合納米粒子的制備方法，其特征在于，步驟一中，所述溶液A的濃度為1-2×10^-3M；所述溶液B的濃度為1-2×10^-8 M。

6.如權(quán)利要求1所述的用于DNA檢測(cè)的熒光復(fù)合納米粒子的制備方法，其特征在于，步驟二中，所述溶液A與溶液B體積比為1：100-1：1000。

7.如權(quán)利要求1所述的用于DNA檢測(cè)的熒光復(fù)合納米粒子的制備方法，其特征在于，步驟二中，所述過(guò)濾膜為聚偏二氟乙烯過(guò)濾膜、聚四氟乙烯過(guò)濾膜、聚醚砜過(guò)濾膜或尼龍過(guò)濾膜中的一種或多種。

8.如權(quán)利要求1所述的用于DNA檢測(cè)的熒光復(fù)合納米粒子的制備方法，其特征在于，步驟二中得到的熒光復(fù)合納米粒子的粒徑為60—120nm。

9.一種利用如權(quán)利要求1-8任一項(xiàng)所述熒光復(fù)合納米粒子進(jìn)行DNA檢測(cè)的方法，其特征在于，包括如下步驟：

(1)將待檢測(cè)DNA分別加入到所述溶液C中，保持5—30分鐘；

(2)采用熒光光譜儀測(cè)試DNA加入前后溶液C的熒光強(qiáng)度，熒光共振能量轉(zhuǎn)移效率高的待測(cè)樣為堿基數(shù)目少的DNA，熒光共振能量轉(zhuǎn)移效率低的待測(cè)樣為堿基數(shù)目多的DNA。

10.如權(quán)利要求9所述的DNA檢測(cè)的方法，其特征在于，步驟(1)中，所述待測(cè)DNA為不同堿基數(shù)目的單鏈DNA、雙鏈DNA、擴(kuò)增前后的DNA或酶切前后的DNA。

11.如權(quán)利要求9所述的DNA檢測(cè)的方法，其特征在于，步驟(1)中，所述待測(cè)DNA的濃度為1×10^-6 M—2×10^-5 M。

12.如權(quán)利要求9所述的DNA檢測(cè)的方法，其特征在于，步驟(1)中，所述待測(cè)DNA的溶液體積為1—20μL。