[發明專利]用于檢測人類OPRM1基因A118G位點多態性的核酸、試劑盒及方法

有效

• 申請號: 201611052799.4
• 申請日: 2016-11-25
• 公開（公告）號: CN106755320B
• 公開（公告）日: 2020-04-07
• 發明（設計）人: 鄒芳;楊惠娟;段衛濤;趙平鋒
• 申請（專利權）人: 武漢海吉力生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;C12N15/11
• 代理公司: 北京匯澤知識產權代理有限公司 11228
• 代理人: 程殿軍;張瑾

本發明公開了用于檢測人類OPRM1基因A118G位點多態性的核酸及試劑盒，同時建立具有特異性強、靈敏度高、準確度高、操作簡單的檢測人類OPRM1基因A118G位點多態性的檢測方法，為阿片類藥物，如嗎啡、芬太尼、曲馬多、氨酚羥考酮、度冷丁等個體化劑量給藥提供指導方案。本發明提供的檢測方法采用完全閉管操作，操作簡單、方便快捷、通過直接探測PCR過程中熒光信號值的獲得檢測的結果，不需要PCR后處理或電泳檢測，克服了常規PCR技術的易污染、出現假陽性，能有效避免非特異性擴增難題，并且適合大批量樣本的檢測。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體涉及一種用于檢測人類OPRM1基因A118G位點多態性的核酸、試劑盒及方法。

背景技術

癌痛是由癌癥所致的疼痛，與腫瘤細胞侵襲機體組織所造成，真實的或可能存在的組織損傷有關，是癌癥患者常見的一種并發癥，嚴重影響晚期癌癥患者的生活質量和治療效果。據世界衛生組織(WHO)統計，確診的腫瘤患者中至少有1/3存在著不同程度的疼痛，晚期患者更是高達60％～90％。因此，癌痛控制與癌癥的早期預防、早期診斷、早期治療被列為WHO的4項重點規劃。

盡管癌痛的藥物治療及非藥物治療方法多種多樣，但是，在所有止痛治療方法中，阿片類鎮痛藥是癌痛治療必不可少的藥物。而藥物反應的個體差異，是臨床用藥中的常見現象，不同個體間藥物穩定劑量的差異，可達40倍以上。在臨床工作中發現不同患者，有效鎮痛劑量差異很大，有研究人員發現10％～30％癌癥患者經阿片類藥物治療后，仍不能有效緩解癌痛。根據相關研究，除了疾病的嚴重程度、藥物之間的相互作用，營養狀況等影響個體的用藥反應外，阿片類藥物如嗎啡、羥考酮、.美沙酮、芬太尼作用時可能受藥物代謝酶、轉運蛋白、受體和藥物作用靶點的基因多態性影響。因此，鎮痛療效相關基因的多態性及其對癌痛治療的影響逐漸受到關注。

人類OPRM1基因定位于染色體6q24～25，是阿片類藥物遺傳差異的主要候選基因。μ阿片受體是內源性和外源性阿片物質鎮痛的主要靶點，OPRM1基因編碼μ阿片受體，目前，已經發現人類OPRM1基因存在100多個基因多態性位點和4個連鎖不平衡(LD)區。研究證實，與鎮痛相關的多態性位點有A6V、N40D、R260H、R265H和S268P，其中N40D(A118G)是最常見的多態性。A118G多態性在不同民族之間突變頻率有一定的差異，非洲人N40D的突變率為4.7％，歐洲人N40D的突變率15.4％，日本人該基因的發生頻率為48.5％，西班牙人則為14％，而在中國人等位基因G的發生頻率約為30％。

A118G(N40D)突變是位于第118位的核苷酸由腺苷酸被鳥苷酸所取代，這個替換導致了μ-阿片受體細胞外N-末端第40位氨基酸由天冬氨酸取代天冬酰胺，使μ-阿片受體丟失了一個糖基化位點。在體內外實驗中都已證實A118G(N40D)多態性能夠影響阿片類藥物的療效，當118G為純合子時，β-內啡肽與受體的結合是118A純合子的3倍，通過藥物動力學和藥效動力學，對嗎啡代謝后的活化形式嗎啡-6-萄糖醛酸(morphine-6-glucuronide，M6G)進行的研究發現，118G純合子會降低M6G的止痛作用，從而影響嗎啡的鎮痛療效。

臨床研究發現，嗎啡對不同OPRM1基因型攜帶者都有一定的鎮痛效應。但鎮痛效應的強弱，三種基因型卻顯示出不同：突變型(GG型)的受試者前后痛閾差明顯低于野生型(AA型)和雜合型(AG型)，提示等劑量嗎啡對發生OPRM1基因型A118G的突變型(GG型)基因女性攜帶者的鎮痛效應，明顯弱于野生型(AA型)和雜合型(AG型)。也可以說，基因型為AA對嗎啡鎮痛用藥更為敏感，GG型的患者嗎啡的需求量大于AA型的患者。因此，檢測OPRM1基因多態性可作為阿片類藥物(如嗎啡、芬太尼、曲馬多、氨酚羥考酮、度冷丁)個體化劑量給藥的預測指標。