[發(fā)明專利]一種地衣芽孢桿菌的連續(xù)培養(yǎng)方法及專用的發(fā)酵系統(tǒng)

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201611049836.6
• 申請(qǐng)日: 2016-11-23
• 公開（公告）號(hào): CN106754477B
• 公開（公告）日: 2020-12-01
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 任海霞;宮志遠(yuǎn);萬魯長(zhǎng);任鵬飛;韓建東;張海蘭;楊鵬;郭兵;姚強(qiáng)
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)資源與環(huán)境研究所
• 主分類號(hào): C12N1/20
• 分類號(hào): C12N1/20;C12M1/34;C12M1/00;C12R1/10
• 代理公司: 濟(jì)南舜源專利事務(wù)所有限公司 37205
• 代理人: 于曉曉

1.地衣芽孢桿菌的連續(xù)培養(yǎng)方法，包括下述的步驟：

(1)種子培養(yǎng)

a.試管斜面菌種活化

將地衣芽孢桿菌菌種轉(zhuǎn)接到試管斜面培養(yǎng)基上，保持32-35℃，培養(yǎng)24-36小時(shí)，進(jìn)行菌種活化；

試管斜面培養(yǎng)基配方為：葡萄糖4g/L，蛋白胨3g/L，NaCl 1g/L，牛肉膏0.5g/L，瓊脂20g/L，pH7.0-7.5，121℃下滅菌20分鐘；

b.三角瓶種子培養(yǎng)

從試管中挑取1-2環(huán)活化好的地衣芽孢桿菌菌種接種到三角瓶中，接種后在32-35℃，100-150rpm的條件下，培養(yǎng)18-20小時(shí)；

三角瓶培養(yǎng)基配方為：葡萄糖15g/L，豆粕粉16g/L，蛋白胨1g/L，NaCl 1g/L，KH₂PO₄0.3g/L，K₂HPO₄ 0.3g/L，pH7.0-7.5，121℃滅菌20分鐘；

c.種子罐菌種培養(yǎng)

向種子罐中輸入經(jīng)過滅菌的培養(yǎng)料A，然后將上述培養(yǎng)好的三角瓶中的菌種按0.5-1％的接種量接種到種子罐中，培養(yǎng)溫度30-32℃，通氣量0.5-1V/V·min，轉(zhuǎn)速150-200rpm，培養(yǎng)18-22小時(shí)；

種子罐中的培養(yǎng)料A的配方為：葡萄糖20g/L，玉米粉5g/L，豆粕粉20g/L，(NH₄)₂HPO₄0.5g/L，NaCl 2.5g/L，CaCl₂ 1g/L，MgSO₄·7H₂O 1.2g/L，KH₂PO₄0.3g/L，K₂HPO₄ 0.7g/L，消泡劑1g/L，pH7.0-7.5；

(2)取培養(yǎng)料B：培養(yǎng)料B配料為，淀粉/葡萄糖25g/L，玉米粉6g/L，豆粕粉30g/L，(NH₄)₂HPO₄ 0.5g/L，NaCl 2.5g/L，CaCl₂ 1g/L，MgSO₄·7H₂O 1.0g/L，KH₂PO₄ 0.3g/L，K₂HPO₄0.3g/L，MnSO₄ 5mg/L，消泡劑1g/L，pH7.0-7.5；

(3)將步驟(2)中的培養(yǎng)料B經(jīng)滅菌處理最后輸送至一級(jí)培養(yǎng)罐，然后將經(jīng)種子罐中培養(yǎng)好的菌種接種至一級(jí)培養(yǎng)罐中發(fā)酵培養(yǎng)；將所得的一級(jí)發(fā)酵液送至二級(jí)培養(yǎng)罐中培養(yǎng)，得到的二級(jí)發(fā)酵液送至芽孢培養(yǎng)罐中培養(yǎng)，得到含有地衣芽孢桿菌的終產(chǎn)物發(fā)酵液；

一級(jí)培養(yǎng)罐培養(yǎng)條件為，溫度33-35℃，攪拌槳轉(zhuǎn)速150rpm，通風(fēng)量0.6-0.8V/V·min；

二級(jí)培養(yǎng)罐培養(yǎng)條件為，溫度33-35℃，攪拌槳轉(zhuǎn)速200rpm，通風(fēng)量0.8-1.1V/V·min；

芽孢培養(yǎng)罐培養(yǎng)條件為，溫度40-42℃，攪拌槳轉(zhuǎn)速150rpm，通風(fēng)量0.6-0.8V/V·min；所述的每次輸送至一級(jí)發(fā)酵罐的培養(yǎng)料B的體積為一級(jí)發(fā)酵罐總?cè)莘e的80％；

從種子罐接種0.5-1％的種子到一級(jí)培養(yǎng)罐，培養(yǎng)8-12小時(shí)，然后從料液儲(chǔ)罐中以恒定速度輸入培養(yǎng)料B至一級(jí)培養(yǎng)罐，得到一級(jí)發(fā)酵液，再以相同的速度將一級(jí)發(fā)酵液輸入滅過菌的二級(jí)培養(yǎng)罐，待二級(jí)培養(yǎng)罐內(nèi)的二級(jí)發(fā)酵液達(dá)到罐體總體積的80％后，開始以同樣的速度將二級(jí)發(fā)酵液輸入滅過菌的芽孢培養(yǎng)罐，待芽孢培養(yǎng)罐內(nèi)發(fā)酵液達(dá)到罐體總體積的80％后，開始以同樣的速度輸出終產(chǎn)物發(fā)酵液。

2.如權(quán)利要求1所述的地衣芽孢桿菌的連續(xù)培養(yǎng)方法，其特征在于，所述步驟(1)中的培養(yǎng)料A滅菌處理的具體步驟是，將配料罐中的物料通過輸送泵Ⅰ輸送至連消裝置滅菌，再輸送至維持罐中暫存，通過輸送泵Ⅱ?qū)捍娴奈锪纤椭晾鋮s裝置中冷卻至30-37℃，將冷卻后的物料送至種子罐中；

所述的步驟(3)中培養(yǎng)料B的滅菌處理步驟具體為，將配料罐中的物料通過輸送泵Ⅰ輸送至連消裝置滅菌，再輸送至維持罐中暫存，通過輸送泵Ⅱ?qū)捍娴奈锪纤椭晾鋮s裝置中冷卻至30-37℃，將冷卻后的物料送至料液儲(chǔ)罐，從料液儲(chǔ)罐中將物料送至一級(jí)培養(yǎng)罐培養(yǎng)。