[發(fā)明專(zhuān)利]人閉鎖蛋白抗原表位肽、抗原、抗體、試劑盒及應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201611046574.8
• 申請(qǐng)日: 2016-11-23
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN108084257B
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-06-12
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 朱建安;朱仕杰
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 深圳市安群生物工程有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): C07K14/705
• 分類(lèi)號(hào): C07K14/705;C07K16/28;G01N33/68;G01N33/577
• 代理公司: 北京天昊聯(lián)合知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11112
• 代理人: 王靜;丁業(yè)平

本發(fā)明涉及人閉鎖蛋白抗原表位肽、抗原、抗體、用途及試劑盒。本發(fā)明的人閉鎖蛋白抗原表位肽的氨基酸序列，為序列表SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示的序列之一。本發(fā)明的閉鎖蛋白抗原由人閉鎖蛋白抗原表位肽與載體蛋白偶聯(lián)制得。本發(fā)明的閉鎖蛋白單克隆抗體或多克隆抗體由本發(fā)明的閉鎖蛋白抗原制得。本發(fā)明的閉鎖蛋白單克隆抗體或多克隆抗體用于制備閉鎖蛋白體外診斷試劑盒。本發(fā)明的人閉鎖蛋白抗原表位肽具有良好的抗原性，用其制備的抗原(免疫原)免疫動(dòng)物能夠產(chǎn)生高度特異性的單克隆抗體和多克隆抗體，從而可應(yīng)用于人閉鎖蛋白的體外檢測(cè)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于多肽化學(xué)和免疫學(xué)領(lǐng)域，具體涉及人閉鎖蛋白(Occludin)抗原表位肽、用該抗原表位肽制備的閉鎖蛋白特異性抗原和相應(yīng)的單克隆抗體或多克隆抗體、所述抗體在制備人閉鎖蛋白體外診斷試劑盒上的應(yīng)用、人閉鎖蛋白體外診斷試劑盒、以及該試劑盒在定量檢測(cè)血清中的人閉鎖蛋白中的應(yīng)用。

背景技術(shù)

血腦屏障(blood brain barrier，BBB)是指腦毛細(xì)血管壁與神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞形成的血漿與腦細(xì)胞之間的屏障和由脈絡(luò)叢形成的血漿和腦脊液之間的屏障，這些屏障能夠阻止某些物質(zhì)(多半是有害的)由血液進(jìn)入腦組織。BBB是由毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞、星形膠質(zhì)細(xì)胞、部分神經(jīng)元、管周細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞間的緊密連接以及基底膜組成。在正常生理?xiàng)l件下，BBB為腦組織選擇性通透營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，包括氧氣，葡萄糖等，并將腦組織的代謝廢物過(guò)濾到血液中，同時(shí)能有效阻止血液的其他成分由毛細(xì)血管自由進(jìn)入腦實(shí)質(zhì)。但一旦發(fā)生腦缺血及缺血后的再灌流，BBB的屏障功能會(huì)逐漸被破壞。當(dāng)BBB損傷達(dá)到非常嚴(yán)重程度時(shí)，組成BBB的毛細(xì)血管將嚴(yán)重喪失其結(jié)構(gòu)與功能的完整性，所有的血液成分包括各種血細(xì)胞將通過(guò)受損的BBB外流進(jìn)入腦實(shí)質(zhì)，發(fā)生腦出血。大多數(shù)腦卒中(約占80-85％)是缺血性腦卒中。它是由于急性血栓形成或其它部位的栓子轉(zhuǎn)移，導(dǎo)致局部腦血管閉塞造成的。腦缺血30～90分鐘后，不可逆的腦損傷即開(kāi)始出現(xiàn)。

閉鎖蛋白(Occludin，也稱(chēng)為咬合蛋白或封閉蛋白)是形成緊密連接結(jié)構(gòu)的重要跨膜蛋白分子，它含有胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域、跨膜結(jié)構(gòu)域和胞外結(jié)構(gòu)域。閉鎖蛋白是構(gòu)成細(xì)胞間屏障的重要結(jié)構(gòu)，在維持細(xì)胞間的屏障功能發(fā)揮重要作用。細(xì)胞及動(dòng)物實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，缺血2小時(shí)可導(dǎo)致BBB損傷以及BBB的重要結(jié)構(gòu)蛋白閉鎖蛋白降解。閉鎖蛋白降解后，部分蛋白片段，尤其是包含胞外結(jié)構(gòu)域的片段，可能進(jìn)入血液循環(huán)。如果BBB損傷越嚴(yán)重，越多的閉鎖蛋白將被降解，進(jìn)入血循環(huán)的片段也可能隨之增加。因此，通過(guò)檢測(cè)血液中閉鎖蛋白片段的含量可快速判斷血腦屏障(BBB)的受損程度，評(píng)估腦出血的風(fēng)險(xiǎn)，對(duì)早期的腦卒中早檢測(cè)早治療，減少腦出血帶來(lái)的嚴(yán)重后果。

檢測(cè)血液中的閉鎖蛋白最理想的方法是免疫測(cè)定。因此，尋找合適的具有免疫原性的閉鎖蛋白抗原表位肽、制備特異性的閉鎖蛋白抗原及抗體即成為了重點(diǎn)。

發(fā)明內(nèi)容

為解決上述現(xiàn)有技術(shù)中所存在的問(wèn)題，本發(fā)明提供了一種人閉鎖蛋白抗原表位肽，用該抗原表位肽制備的閉鎖蛋白特異性抗原和相應(yīng)的單克隆抗體或多克隆抗體，其在制備人閉鎖蛋白體外診斷試劑盒上的應(yīng)用，人閉鎖蛋白體外診斷試劑盒，以及該試劑盒在定量檢測(cè)血清中的人閉鎖蛋白中的應(yīng)用。

具體而言，本發(fā)明提供了：

一種人閉鎖蛋白抗原表位肽，其中所述閉鎖蛋白抗原表位肽的氨基酸序列為如下兩者之一：

(1)Thr-Ser-Pro-Val-Asp-Asp-Phe-Arg-Gln-Lys-Pro-Lys-Arg-Tyr。

(2)Lys-Gln-Leu-Lys-Ser-Lys-Leu-Ser-His-Ile-Lys-Lys-Asp-Arg-T yr。

本發(fā)明還提供了一種閉鎖蛋白抗原，其是通過(guò)使所述的人閉鎖蛋白抗原表位肽(1)與載體蛋白偶聯(lián)制備而成的。

本發(fā)明還提供了一種閉鎖蛋白抗原，其是通過(guò)使所述的人閉鎖蛋白抗原表位肽(2)與載體蛋白偶聯(lián)制備而成的。