[發明專利]一種結直腸癌生物標志物及其應用

在審

• 申請號: 201611046191.0
• 申請日: 2016-11-22
• 公開（公告）號: CN108085385A
• 公開（公告）日: 2018-05-29
• 發明（設計）人: 杜冀暉;黃虞;王秀
• 申請（專利權）人: 深圳市南山區人民醫院
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886
• 代理公司: 北京品源專利代理有限公司 11332
• 代理人: 鞏克棟;侯桂麗

本發明涉及一種結直腸癌生物標志物，所述生物標志物為miR?92a；本發明還提供了一種用于診斷結直腸癌的試劑盒，其包含上述結直腸癌生物標志物，還包括PCR反應常用的酶和試劑；本發明還進一步提供了上述結直腸癌生物標志物在制備用于結直腸癌診斷藥物中的應用以及在制備用于抑制結直腸癌腫瘤血管新生藥物中的應用。本發明提供的結直腸癌生物標志物在結直腸癌細胞和組織中高表達，與腫瘤血管新生增加密切相關，可通過抑制PTEN的表達發揮其促進結直腸癌血管新生的生物學功能。

技術領域

本發明涉及涉及生物醫學技術領域，尤其涉及一種結直腸癌生物標志物及其對結直腸癌診斷和抑制結直腸癌腫瘤血管新生中的應用。

背景技術

結直腸癌(colorectal cancer，CRC)是人類常見的消化系統惡性腫瘤，發病率居惡性腫瘤的第3位，起病隱匿，預后較差川。近年研究發現，microRNAs(miRNAs)是一類獨特的非編碼小RNA，在腫瘤細胞中高表達或低表達起到癌基因或抑癌基因的作用，使細胞增殖和分化失去控制，導致腫瘤的發生發展。研究證實，miR-92a在結直腸癌等多種腫瘤組織中異常高表達，并與結腸癌的淋巴結轉移和預后相關，因此，miR-92a被認為是一種癌基因，可能在CRC發生發展中起著關鍵調控作用。具有非可控的血管新生能力是惡性腫瘤的基本生物學特征之一，腫瘤的生長、侵襲和轉移均與血管新生密切相關。研究發現，miR-92a與血管內皮細胞形成、腫瘤血管新生有關。然而，目前有關miR-92a對結直腸癌血管新生功能的影響及其調控機制尚不清楚。

本發明通過檢測miR-92a在結直腸癌組織中的表達水平，分析其與腫瘤血管新生的相關性；通過轉染miR-92a-mimic、inhibitor上調或抑制結直腸癌細胞HCT116、SW620中miR-92a的表達水平，觀察miR-92a對HUVEC血管內皮細胞新生功能的影響及對其下游潛在靶點PTEN表達的調控作用，探討miR-92a影響結直腸癌血管新生的作用及機制，為結直腸癌的分子靶向治療提供實驗依據。

發明內容

鑒于現有技術中存在的問題，本發明的目的在于提供一種結直腸癌生物標志物及其對結直腸癌診斷和抑制結直腸癌腫瘤血管新生中的應用。

為達此目的，本發明采用以下技術方案：

第一方面，本發明提供了一種結直腸癌生物標志物，所述生物標志物為miR-92a。

本發明采用qRT-PCR方法檢測了廣東醫學院附屬深圳南山醫院2014年6月至2015年12月經手術切除的25例結直腸癌組織和對應癌旁組織及4種結直腸癌細胞(HCT116、SW620、SW480、HT29)中miR-92a的表達；免疫組織化學法檢測結直腸癌和癌旁組織中CD31陽性表達的微血管密度(microvessel density，MVD)，Pearson相關性分析探討miR-92a表達與腫瘤血管新生MVD的相關性。通過轉染miR-92a-mimic，inhihitor上調或抑制結直腸癌細胞HCT116、SW620中miR-92a的表達水平，采用小管形成實驗檢測miR-92a不同表達對HUVEC小管形成的影響，免疫印跡法檢測對其下游潛在靶點PTEN的蛋白表達的影響。結果表明：結直腸癌組織miR-92a的表達水平顯著高于對應癌旁組織(P<0.01)；4種人結腸癌細胞系miR-92a的表達水平均顯著高于正常腸上皮組織(P<0.05)；結直腸癌組織CD31陽性微血管密度顯著高于癌旁組織(P<0.01)，miR-92a表達水平與結直腸癌血管新生MVD呈顯著正相關(r＝0.580，P＝0.01)；上調miR-92a表達的HCT116細胞培養上清液可以顯著促進HLJVEC小管形成(P<0.05)；上調miR-92a表達可以顯著抑制HCT116細胞中PTEN蛋白表達水平(P<0.01)。因此得出：miR-92a在結直腸癌細胞和組織中高表達，與腫瘤血管新生增加密切相關；miR-92a可通過抑制PTEN的表達發揮促進結直腸癌血管新生的生物學功能。