[發(fā)明專利]包埋型納米鐵/復(fù)合微生物菌劑及其制備方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201611044542.4
• 申請日: 2016-11-24
• 公開（公告）號(hào): CN106754855B
• 公開（公告）日: 2020-07-28
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳元彩;張振
• 申請（專利權(quán)）人: 華南理工大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N11/10
• 分類號(hào): C12N11/10;C12N11/084;C12N11/14;C12N1/20;C02F3/34;C12R1/01;C12R1/07;C12R1/38;C12R1/40;C02F101/36;C02F101/34
• 代理公司: 廣州市華學(xué)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 44245
• 代理人: 羅觀祥

1.包埋型納米鐵/復(fù)合微生物菌劑的制備方法，其特征在于包括如下步驟：

（1）菌體的制備：

分別挑取土壤桿菌（Agrobacterium sp.）、陰溝腸桿菌（Enterobactercloacae.）、桿狀菌（Bacillus sp.）、戈登氏菌（Gordonia sp.）、惡臭假單胞菌（Pseudomonas putida.）、施氏假單胞菌（Pseudomonas stutzeri.）2環(huán)分別轉(zhuǎn)移到營養(yǎng)液中，細(xì)菌在35-37℃的條件下培養(yǎng)1-3天，以5-18%的體積比例接種至含增殖培養(yǎng)基的容器中，在35-37℃的條件下培養(yǎng)1-3天，離心處理，獲得上述菌體的對數(shù)生長期細(xì)胞；用磷酸鹽緩沖液洗滌1-2次后；按體積百分比計(jì)，分別取5～8%土壤桿菌，4～6%桿狀菌，7～15% 陰溝腸桿菌，10～19% 戈登氏菌，13～27% 惡臭假單胞菌和35～45%施氏假單胞菌混合，獲得用于三氯生降解的菌體A；

（2）納米鐵溶液的制備：

采用液相還原法，在氮?dú)獗Ｗo(hù)的液相體系中，強(qiáng)還原劑KBH₄還原FeSO₄·7H₂O得到Fe⁰，用Fe⁰制備濃度為0.1~0.6g/L的納米鐵溶液，記為溶液B；

（3）包埋劑瓊脂、PVA、SiO₂溶液的制備：

將瓊脂、PVA在90-100℃的溫度下加熱完全溶解于清水，得到瓊脂質(zhì)量百分含量為5~9%，PVA質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為7.5~15%的溶液，再加入SiO₂，控制SiO₂在混合物中質(zhì)量濃度為1~3mg/L，待混合交替冷卻至50℃，記為溶液C；

（4）交聯(lián)劑硫酸鋁飽和硼酸溶液的制備：

將硫酸鋁粉末溶于飽和硼酸溶液中，得到摩爾濃度為0.1~1mol/L的硫酸鋁的飽和硼酸溶液，記為溶液D；

（5）納米鐵/復(fù)合微生物菌劑制備：

在50-70℃恒溫水浴條件下，按體積比分別取15~18%溶液B，6~15%的菌體A加入到57~66%溶液C中，攪拌混合均勻，在氮?dú)獗Ｗo(hù)的環(huán)境下滴加至室溫的1-22%溶液D中，交聯(lián)處理，清洗，保存，得到納米鐵/復(fù)合微生物菌劑。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述營養(yǎng)液主要成分為牛肉膏6.0g/L，NaCl5.0g/L，蛋白胨 10.0g/L，大豆粉2.0 g/L，pH 6.5，其余為水。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述增殖培養(yǎng)基主要成分為酪蛋白20.0 g/L，磷酸氫鉀3.0 g/L，葡萄糖3.0 g/L，大豆粉4.0 g/L，氯化鈉5.0 g/L，其余為水。

4.據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，按體積百分比計(jì)，所述磷酸鹽緩沖液的成分為氯化鈉9.0 g/L，氯化鉀0.3 g/L，磷酸氫二鉀1.2 g/L和磷酸二氫鉀0.3 g/L，其余為水。

5.據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述的保存是指在無菌生理鹽水中浸泡并放置冰箱中4℃下保存。

6.據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述土壤桿菌（Agrobacterium sp.）、陰溝腸桿菌（Enterobactercloacae.）、桿狀菌（Bacillus sp.）、戈登氏菌（Gordonia sp.）、惡臭假單胞菌（Pseudomonas putida.）、施氏假單胞菌（Pseudomonas stutzeri.）2環(huán)分別轉(zhuǎn)移到30-40mL營養(yǎng)液中。