[發明專利]一種N-磷酸化肽段和蛋白質富集材料及其制備和應用

有效

• 申請號: 201611043532.9
• 申請日: 2016-11-21
• 公開（公告）號: CN108079957B
• 公開（公告）日: 2020-08-11
• 發明（設計）人: 張麗華;胡曄晨;江波;翁葉靖;高航;楊開廣;張玉奎
• 申請（專利權）人: 中國科學院大連化學物理研究所
• 主分類號: B01J20/22
• 分類號: B01J20/22;B01J20/30;B01J20/28;C07K1/14;G01N1/40
• 代理公司: 沈陽科苑專利商標代理有限公司 21002
• 代理人: 馬馳

1.一種N-磷酸化肽段和蛋白質富集材料的制備方法，其特征在于：采用種子生長法制備無孔硅膠微球，通過模板引導溶解和再沉積的方法形成核殼微球初始殼層，最后經過酸回流得到具有垂直孔道的亞二微米核殼硅膠；

通過N-叔丁氧羰基-L-酪氨酸與N,N′-二甲基吡啶胺反應形成支撐分子，在其上絡合金屬離子形成磷酸識別功能分子；

最后將磷酸識別功能分子與具有垂直孔道的亞二微米核殼硅膠通過酰胺鍵共價結合得到磷酸識別功能硅膠材料；

所述采用種子生長法制備無孔硅膠微球的過程：

（1）將水解液和0.1-10mL正硅酸乙酯混合；

水解液由0.1-10mL氨水、0.1-10mL水和0.1-100mL無水乙醇混合而成；

（2）向步驟（1）所得溶液中加入0.1-1mL水和1-10mL正硅酸乙酯，25-100℃反應1-60min，并重復此加入和反應過程2-20次，分離收集固體，得到Sead1；

（3）將0.001-100g Sead1加入0.01-100mL新配水解液中，然后加入0.1-1mL水和1-10mL正硅酸乙酯，25-100℃反應1-60min，并重復此加入和反應過程2-20次，分離收集固體，得到Sead2；水解液由0.1-10mL氨水、0.1-10mL水和0.1-100mL無水乙醇混合而成；

所述通過模板引導溶解和再沉積的方法形成核殼微球初始殼層的過程為：

（1）將0.001-100g Sead2分散于0.01-100mL水中，加入1-10 g十六烷基三甲基氯化銨或者十六烷基三甲基溴化銨、0.1-10mL十三烷、0.1-100mg氟化銨和0.1-10mL氨水，80-95℃反應0.1-100h，得到NPs；

（2）將烘干的NPs于100-1000℃燒結0.1-24h形成核殼微球初始殼層；

所述的經過酸回流得到具有垂直孔道的亞二微米核殼硅膠過程為：將0.001-100g燒結后NPs分散于10-30mL 1-10N的 HCl、H₂SO₄、HNO₃、H₃PO₄、HF中的一種或兩種以上酸溶液中，100-200℃反應10-24h；

所述通過N-叔丁氧羰基-L-酪氨酸與N,N′-二甲基吡啶胺反應形成支撐分子，在其上絡合金屬離子形成磷酸識別功能分子的過程為：

通過N-叔丁氧羰基-L-酪氨酸與N,N′-二甲基吡啶胺在多聚甲醛的存在下反應生成保護的前體分子Boc-dpa，Boc-dpa去保護后與戊二酸酐反應生成支撐分子GAPT，GAPT與金屬離子絡合生成磷酸識別功能分子GAPT-M；

所述磷酸識別功能分子GAPT-M與具有垂直孔道的亞二微米核殼硅膠通過共價結合得到磷酸識別功能硅膠材料的過程為：

將亞二微米核殼硅膠分散于二甲基甲酰胺中，加入GAPT-M，室溫攪拌反應24-48h；亞二微米核殼硅膠于二甲基甲酰胺中的濃度為0.001-100g/mL，亞二微米核殼硅膠與GAPT-M的質量比為0.001-100;

GAPT-M的羧基與亞二微米核殼硅膠上的氨基通過縮合反應形成酰胺鍵，以此將GAPT-M共價結合于亞二微米核殼硅膠上。