[發(fā)明專利]一種環(huán)狀的合成多肽H及其應(yīng)用和抗菌制劑

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201611034537.5
• 申請(qǐng)日: 2016-11-22
• 公開（公告）號(hào): CN106699861B
• 公開（公告）日: 2020-06-26
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李詩豪;李富花;呂新嘉;相建海
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)科學(xué)院海洋研究所
• 主分類號(hào): C07K14/435
• 分類號(hào): C07K14/435;A61K38/17;A61P31/04
• 代理公司: 沈陽科苑專利商標(biāo)代理有限公司 21002
• 代理人: 馬馳

本發(fā)明涉及一種環(huán)狀的合成多肽H及其抗菌應(yīng)用。本發(fā)明所涉及的環(huán)狀的合成多肽H具有序列列表中SEQ ID No.1所示的氨基酸序列及結(jié)構(gòu)特征；該環(huán)狀的合成多肽H衍生自序列列表中SEQ ID No.2所示中國(guó)明對(duì)蝦抗脂多糖因子FcALF8的LPS結(jié)合結(jié)構(gòu)域；經(jīng)對(duì)本發(fā)明涉及的環(huán)狀的合成多肽H進(jìn)行生物功能體外驗(yàn)證，證實(shí)其對(duì)革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌的生長(zhǎng)或增殖均具有很強(qiáng)的抑制作用。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種環(huán)狀的合成多肽H及其抗菌應(yīng)用，具體地說是一種合成的衍生自中國(guó)明對(duì)蝦抗脂多糖因子FcALF8的脂多糖(LPS)結(jié)合結(jié)構(gòu)域的環(huán)狀多肽及其抗菌應(yīng)用。

背景技術(shù)

對(duì)蝦的養(yǎng)殖在我國(guó)的水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)中占有重要地位，近些年來，對(duì)蝦養(yǎng)殖過程中的病害問題已經(jīng)嚴(yán)重阻礙了其養(yǎng)殖生產(chǎn)的健康發(fā)展，抗生素的濫用與環(huán)境的惡化使海水養(yǎng)殖動(dòng)物的病害難以從根本上得到控制。

抗菌肽(蛋白)被認(rèn)為是魚、蝦、貝等防御細(xì)菌、病毒等外源病原感染的重要效應(yīng)分子，在動(dòng)物的先天免疫過程中發(fā)揮著重要作用。目前從甲殼動(dòng)物中發(fā)現(xiàn)的抗菌肽種類繁多，抗脂多糖因子(anti-lipopolysaccharide factor，ALF)就是其中一類重要的抗菌肽。1982年，Tanaka等首次從中國(guó)鱟(Tachypleus tridentatus)和北美鱟(Limulus polyphemus)的血細(xì)胞中分離得到ALF，并發(fā)現(xiàn)其能抑制LPS介導(dǎo)的凝血反應(yīng)的激活。1985年，Morita等發(fā)現(xiàn)ALF還具有很強(qiáng)的抗革蘭氏陰性菌活性。之后，人們相繼在斑節(jié)對(duì)蝦(Penaeus monodon)、中國(guó)明對(duì)蝦(Fenneropenaeus chinensis)、日本囊對(duì)蝦(Marsupenaeus japonicus)、凡納濱對(duì)蝦(Litopenaeus vannamei)、桃紅對(duì)蝦(Farfantepenaeus duorarum)等多種甲殼動(dòng)物中發(fā)現(xiàn)ALF編碼基因的存在，并證實(shí)ALF基因的重組蛋白具有抑制革蘭氏陰性菌和革蘭氏陽性菌生長(zhǎng)的活性。另外，研究還發(fā)現(xiàn)對(duì)蝦白斑綜合征病毒(WSSV)預(yù)先與重組表達(dá)的ALF蛋白一起孵育后再注射入蝦體中，能明顯抑制注入蝦體中的WSSV的復(fù)制。

與傳統(tǒng)抗生素的作用機(jī)理不同，ALF能夠直接中和細(xì)菌細(xì)胞壁的脂多糖，溶解細(xì)菌，因此不易使細(xì)菌產(chǎn)生耐藥性。ALF抗病毒的作用機(jī)理目前還不太清楚。隨著抗生素的應(yīng)用，許多病原菌對(duì)現(xiàn)有抗生素逐步產(chǎn)生耐藥性，而新型抗生素的發(fā)現(xiàn)又極其困難，因此，ALF的研究為開發(fā)新型抗菌藥物開辟了廣闊的前景。

研究發(fā)現(xiàn)，ALF氨基酸序列中的兩個(gè)保守半胱氨酸之間形成二硫鍵，這兩個(gè)半胱氨酸殘基之間的短肽為一段陰離子多肽，具有與LPS結(jié)合的能力，這段保守的結(jié)構(gòu)命名為L(zhǎng)PS結(jié)合結(jié)構(gòu)域，被認(rèn)為是ALF降解革蘭氏陰性菌細(xì)胞壁脂多糖的功能域。2011年，SachinSharma等研究了根據(jù)鋸緣青蟹(Scylla serrata)ALF的LPS結(jié)合結(jié)構(gòu)域合成的具24個(gè)氨基酸殘基的多肽在抗菌免疫過程中作用，發(fā)現(xiàn)合成多肽SsALF24具有結(jié)合LPS的活性并且對(duì)大腸桿菌都具有明顯的抑制作用，其最小抑制濃度為16.16～32.32uM(Sharma S,Yedery RD,Patgaonkar MS,Selvaakumar C,Reddy KV.Antibacterial activity of a syntheticpeptide that mimics the LPS binding domain of Indian mud crab,Scylla serrataanti-lipopolysaccharide factor(SsALF)also involved in the modulation ofvaginal immune functions through NF-kB signaling.Microbial pathogenesis 2011；50:179-191.)。