[發(fā)明專利]鑒別HD-HOOK效應樣本的方法和鑒定免疫測定中的HD-HOOK效應的系統(tǒng)

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201611034252.1
• 申請日: 2016-11-22
• 公開（公告）號: CN108204959B
• 公開（公告）日: 2020-10-30
• 發(fā)明（設計）人: 楊陽;趙衛(wèi)國;張向輝
• 申請（專利權(quán)）人: 博陽生物科技（上海）有限公司
• 主分類號: G01N21/63
• 分類號: G01N21/63;G01N33/577;G01N33/576;G01N33/53;G01N33/543
• 代理公司: 北京聿宏知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11372
• 代理人: 吳大建

1.一種鑒別HD-HOOK效應樣本的方法，其特征在于，所述方法包括如下步驟：對校準品、峰值校準品、含待測目標抗原或抗體的待測樣本進行化學發(fā)光免疫反應，激發(fā)和記錄化學發(fā)光的第一次和第二次讀數(shù)，將峰值校準品的第二次和第一次讀數(shù)之間差值的增幅A記為R0，對比待測樣本的第二次和第一次讀數(shù)之間的增幅A是否大于R0，如果大于R0則樣本具有HD-HOOK效應，如果小于R0則不具有HD-HOOK效應；

所述A＝(RLU2/RLU1-1)x100％，其中RLU1和RLU2分別為化學發(fā)光的第一次和第二次讀數(shù)。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法包括如下步驟：

(1)將校準品、峰值校準品、含待測目標抗原的待測樣本與第一抗體包被的發(fā)光微粒、標記物標記的第二抗體混合，溫育得混合液；或?qū)⑿势?、峰值校準品、含待測目標抗體的待測樣本與第一抗原包被的發(fā)光微粒、標記物標記的第二或抗原混合，溫育得混合液；

(2)第一次讀數(shù)：在步驟(1)的混合液中再加入標記物特異結(jié)合物標記的感光微粒，溫育后進行激發(fā)光照射并檢測發(fā)射光量，光子計數(shù)器讀數(shù)，計為RLU1；

(3)第二次讀數(shù)：將步驟(2)中進行第一次讀數(shù)后的反應溶液進一步溫育后，再進行激發(fā)光照射并檢測發(fā)射光量，光子計數(shù)器讀數(shù)，計為RLU2；

(4)計算樣本第二次讀數(shù)所得信號值相對于第一次讀數(shù)所得信號值的增幅A，A＝(RLU2/RLU1-1)x100％；

(5)將峰值校準品的第二次和第一次讀數(shù)之間差值的增幅A記為R0；

(6)將待測樣本的兩次讀數(shù)增幅A值與R0比較，如果A大于等于R0，則鑒定此樣本為HD-HOOK效應樣本。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于，將待測樣本的兩次讀數(shù)增幅A值與R0比較，如果A大于等于R0，則待測樣本為HD-HOOK效應樣本，需要稀釋；如果A小于R0，則直接用校準曲線計算出樣本濃度。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，發(fā)光微粒是指填充有發(fā)光化合物和鑭系元素化合物的高分子微粒；所述感光微粒是填充有感光化合物的高分子微粒，在紅色激光激發(fā)下，可以產(chǎn)生單線態(tài)氧離子。

5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，步驟(2)和(3)中，以600～700nm的紅色激發(fā)光照射，檢測反應溶液的發(fā)射光量；發(fā)射光的檢測波長為520～620nm。

6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，所述抗原是指具有免疫原性的物質(zhì)；所述抗體是指機體產(chǎn)生的能識別特定外來物的免疫球蛋白；所述第一抗體和第二抗體指可特異性結(jié)合于所述目標抗原的抗體；所述第一抗原和第二抗原指可特異性結(jié)合于所述目標抗體的抗原。

7.一種用于鑒定免疫測定中的HD-HOOK效應的系統(tǒng)，所述系統(tǒng)包括：

免疫反應裝置，其用于實施化學發(fā)光免疫反應，

化學發(fā)光免疫反應激發(fā)和計數(shù)裝置，其用于激發(fā)和記錄化學發(fā)光的第一次和第二次讀數(shù)，

處理器，其用于根據(jù)待測樣本的第二次和第一次讀數(shù)之間的差值增幅A來確定HD-HOOK效應樣本的存在；

所述A＝(RLU2/RLU1-1)x100％，其中RLU1和RLU2分別為化學發(fā)光的第一次和第二次讀數(shù)。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的系統(tǒng)，所述系統(tǒng)包括：

化學發(fā)光免疫反應激發(fā)和計數(shù)裝置，其用于激發(fā)和記錄化學發(fā)光的第一次和第二次讀數(shù)，

處理器，其用于對比待測樣本的第二次和第一次讀數(shù)之間的差值增幅A是否大于峰值校準品的第二次和第一次讀數(shù)之間差值的增幅R0，如果大于R0則樣本具有HD-HOOK效應，如果小于R0則不具有HD-HOOK效應，

其中化學發(fā)光的第二次讀數(shù)是針對同一免疫反應間隔一段時間后再次激發(fā)和讀數(shù)得到的。