[發明專利]一種原代人乳腺癌細胞分離及培養方法

在審

• 申請號: 201611032625.1
• 申請日: 2016-11-15
• 公開（公告）號: CN108070559A
• 公開（公告）日: 2018-05-25
• 發明（設計）人: 不公告發明人
• 申請（專利權）人: 江蘇齊氏生物科技有限公司
• 主分類號: C12N5/09
• 分類號: C12N5/09
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明提供一種原代人乳腺癌細胞分離及培養方法，包括步驟：(a)含雙抗預冷PBS清洗組織標本；(b)剪碎組織，混合酶液消化；(c)完全混合培養基終止消化；(d)連續篩網過濾，收集濾液離心；(e)重懸細胞沉淀，接種于培養瓶中；(f)培養數天后更換混合完全培養基繼續培養。本發明提供了一種耗時短、高效獲得人乳腺癌細胞的方法。

技術領域

本發明屬于細胞生物學領域，具體涉及一種原代人乳腺癌細胞分離及培養方法。

背景技術

乳腺癌是一種通常發生在乳房腺上皮組織的惡性腫瘤，是嚴重影響婦女身心健康甚至危及生命的最常見的惡性腫瘤之一，腫瘤的發生和轉移與腫瘤細胞所處的微環境有著密切關系。腫瘤微環境是一個錯綜復雜的系統，其中腫瘤相關成纖維細胞(cancer-associated fibroblast，CAS)是腫瘤微環境最主要的宿主細胞之一。原代培養的人乳腺癌CAF是直接從組織分離下來的，其生物學特性及遺傳特性未發生明顯變化，最接近和反映其體內生長特性，是研究腫瘤微環境CAF本身生物學特征、基因表達、體外化療藥物敏感試驗快速篩選有效化療藥物。藥物療效體外試驗的模型，也是研究乳腺癌微環境CAF與乳腺癌細胞之間相互關系的理想模型。但是人乳腺癌中含有大量脂肪組織，使得分離和純化人乳腺癌CAF存在一定難度。本發明提供一種相對完善的人乳腺癌組織成纖維細胞原代培養方法，為研究乳腺腫瘤微環境CAF及其與乳腺癌細胞生物相互作用奠定了基礎，也為腫瘤的發生發展及綜合治療的研究提供了手段。

發明內容

本發明的目的是建立一種耗時短、高效獲得人乳腺癌細胞的方法。

為了解決上述所涉及到的問題，本發明采取如下方法獲得原代人乳腺癌細胞：

本發明提供一種原代人乳腺癌細胞分離及培養方法，包括步驟：(a)含雙抗預冷PBS清洗組織標本；(b)剪碎組織，混合酶液消化；(c)完全混合培養基終止消化；(d)連續篩網過濾，收集濾液離心；(e)重懸細胞沉淀，接種于培養瓶中；(f)培養數天后更換混合完全培養基繼續培養。

可選的組織標本為新鮮的組織標本；

可選的混合酶液為0.05％-0.1％的I型膠原酶、0.05％-0.1％的II型膠原酶和0.1％-0.15％的透明質酸酶，消化時間為1.5h-2h；

可選的混合完全培養基為含10％FBS的H-DMEM和1640(2∶1)；

可選的連續篩網過濾的方法為，消化后的組織液依次經過80目、100目、200目篩網過濾；

可選的差速貼壁的方法為混合完全培養基重懸接種后，培養2-4h后更換新鮮完全培養基。

本發明提供一種混合酶消化法獲得原代人乳腺癌細胞的方法，不僅操作步驟簡便，耗時短，而且獲得的人乳腺癌細胞活性高。

附圖說明

圖1培養72h細胞圖片(100×)

具體實施方式

為了使本發明的目的及優勢更清晰地展現，現將具體實施方式進一步闡述。此處所闡述的具體實施方式僅針對本發明進行解釋，并不用于限定本發明。

本發明選擇新鮮的人乳腺癌組織，分離人乳腺癌細胞。具體操作如下：

1、用含雙抗預冷的PBS沖洗組織標本2-3次；

2、充分剪碎組織標本，加入0.05％-0.1％的I型膠原酶、0.05％-0.1％的II型膠原酶和0.1％-0.15％的透明質酸酶的混合酶液，37℃搖床水浴鍋中消化1.5h-2h；

3、用含10％FBS的H-DMEM和RPMI1640(2∶1)混合完全培養基終止消化；