[發明專利]利用特異性揮發物篩選昆蟲相關嗅覺蛋白的方法

有效

• 申請號: 201611030838.0
• 申請日: 2016-11-16
• 公開（公告）號: CN106636363B
• 公開（公告）日: 2020-06-30
• 發明（設計）人: 尹姣;李克斌;張帥;房遲琴;王超群;曹雅忠
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院植物保護研究所
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 王文君

1.利用特異性揮發物篩選昆蟲相關嗅覺蛋白的方法，其特征在于，從公共數據庫或通過測序技術獲取在昆蟲觸角中表達的嗅覺基因信息，利用特異性揮發物處理昆蟲24-48h，然后檢測昆蟲觸角中不同嗅覺基因的表達量，與對照未經過特異性揮發物處理的昆蟲相比，將表達量增加的嗅覺基因，其所編碼的蛋白作為候選的昆蟲相關嗅覺蛋白；

所述昆蟲為華北大黑鰓金龜；

所述特異性揮發物為芳樟醇或反-2-己烯醇；其中，芳樟醇對應的相關嗅覺蛋白為OBP7、8、9、11、13、15、27、28，反-2-己烯醇對應的相關嗅覺蛋白為OBP4、9、13。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，包括以下步驟：

1)提取昆蟲觸角RNA，轉錄組測序獲得大量在昆蟲觸角中表達的嗅覺基因；

2)將昆蟲成蟲置于設有透氣孔的養蟲箱中，饑餓處理24-48h；然后將可持續釋放特異性揮發物的容器放入養蟲箱中，24-48h后取昆蟲觸角，提取RNA；同時設立對照組，即饑餓處理后的昆蟲進行正常飼喂，24-48h后取昆蟲觸角，提取RNA；

3)檢測昆蟲觸角中不同嗅覺基因表達量的變化。

3.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，步驟2)所述昆蟲成蟲為羽化后2日齡成蟲。

4.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，步驟2)所述養蟲箱的材質包括有機玻璃，養蟲箱的頂端設有一個直徑為1cm小孔作為透氣孔，箱體為正方體或長方體。

5.根據權利要求2-4任一項所述的方法，其特征在于，步驟2)將5個可持續釋放特異性揮發物的容器分別置于養蟲箱的四個角落和中間；其中，所述可持續釋放特異性揮發物的容器為盛有特異性揮發物溶液的玻璃瓶，所述玻璃瓶用封口膜封口，封口膜上設有若干透氣孔。

6.根據權利要求2-4任一項所述的方法，其特征在于，步驟3)是將RNA反轉錄成cDNA，并利用熒光定量PCR檢測昆蟲觸角中不同嗅覺基因的表達量。

7.根據權利要求6所述的方法，其特征在于，熒光定量PCR所用引物序列如SEQ ID NO:1-52所示。

8.根據權利要求6所述的方法，其特征在于，熒光定量PCR的反應體系為：

反應程序為：95℃60s；95℃5s，60℃15s，40個循環。