[發明專利]檢測尿液中單羥酚類代謝物的試劑盒及其制備方法

有效

• 申請號: 201611023274.8
• 申請日: 2016-11-21
• 公開（公告）號: CN106645120B
• 公開（公告）日: 2019-01-15
• 發明（設計）人: 余柯辰
• 申請（專利權）人: 江蘇華鳴生物科技有限公司
• 主分類號: G01N21/78
• 分類號: G01N21/78
• 代理公司: 無錫華源專利商標事務所(普通合伙) 32228
• 代理人: 聶啟新

檢測尿液中單羥酚類代謝物的試劑盒，包括盛裝有檢測試劑的安瓿瓶，所述檢測試劑為吸附有顯色混合物的殼聚糖復合纖維素氣凝膠，其制備方法為分層制備殼聚糖?纖維素?殼聚糖氣凝膠，然后將酪氨酸酶、色氨酸酶以及可以和酪氨酸、色氨酸分解后得到的中間代謝物發生反應并顯示顏色的顯色試劑通過酶固定的方法吸附到氣凝膠上。本發明對尿液中微量的單羥酚類代謝物具有特異性檢測功能，檢測方法簡單、快速，準確率高。

技術領域

本發明涉及腫瘤標志物檢測技術領域，尤其是涉及一種檢測尿液中單羥酚類代謝物的試劑盒及其制備方法。

背景技術

腫瘤標志物是指在腫瘤的發生和增殖過程中，由腫瘤細胞本身所產生的或者是由機體對腫瘤細胞反應而產生的，反映腫瘤存在和生長的一類物質，包括蛋白質、激素、酶(同工酶)及癌基因產物等。化驗患者血液或體液中的腫瘤標志物，可在腫瘤普查中早期發現腫瘤,并觀察腫瘤治療的療效以及判斷患者預后。

單羥酚類代謝物(即酪氨酸、色氨酸等)作為腫瘤標志物，已經被眾多學者所認知，例如CN102004103、快速尿液單羥酚代謝物檢測在惡性腫瘤中的診斷價值(檢驗醫學與臨床，2016第6期，李興翠等)、尿液單羥酚類代謝物檢測在惡性腫瘤早期預測中的應用價值(檢驗醫學與臨床，2015年第16期，黃學梅等)。

目前這些檢測方法均為無機化學試劑檢測法，無機化學檢測法的優點是檢測試劑制備簡單。但是，尿液中的單羥酚類代謝物的含量是及其微量的，并且尿液中還存在多種其他多種成分會影響檢測結果，因此，開發一種更為精密、特異性更高的檢測方法迫在眉睫。

發明內容

針對現有技術存在的上述問題，本申請人提供了一種檢測尿液中單羥酚類代謝物的試劑盒及其制備方法。本發明對尿液中微量的單羥酚類代謝物具有特異性檢測功能，檢測方法簡單、快速，準確率高。

本發明的技術方案如下：

檢測尿液中單羥酚類代謝物的試劑盒，包括盛裝有檢測試劑的安瓿瓶，所述檢測試劑為吸附有顯色混合物的殼聚糖復合纖維素氣凝膠。其制備方法為：

(1)將天然纖維素進行溶解，得到纖維素溶液，再將纖維素溶液流延或涂覆成膜狀，通過凝固再生和水洗，制備成厚度為20～25微米的纖維素膜；

(2)在步驟(1)制備得到的纖維素膜上流延或涂覆一層殼聚糖溶液，凝固后得到一層厚度為20～25微米的殼聚糖膜；

(3)用無水乙醇對步驟(2)得到的纖維素-殼聚糖復合膜進行置換，去除其中的水分，然后將纖維素-殼聚糖復合膜反轉放置，使纖維素膜位于上方；

(4)在步驟(3)得到的纖維素-殼聚糖復合膜的纖維素膜上流延或涂覆一層殼聚糖溶液，凝固后得到一層厚度為20～25微米的殼聚糖膜，得到殼聚糖-纖維素-殼聚糖復合膜；

(5)用無水乙醇對步驟(4)得到的殼聚糖-纖維素-殼聚糖復合膜進行置換，去除其中的水分，然后經冷凍干燥或臨界干燥，得到殼聚糖-纖維素-殼聚糖復合氣凝膠；

(6)將酪氨酸酶和色氨酸酶按照2:1的質量比混合均勻得到酶混合物，并且將高碘酸鈉和2,4-二硝基苯阱、氫氧化鈉按照2:1:0.5的質量比混合均勻得到標記混合物；

(7)將酶混合物和標記混合物按照2～3:1的質量比混合，然后置于去離子水配制成固體質量分數為15～20％的混懸液，然后將步驟(5)得到的復合氣凝膠放入該混懸液中，在水浴振蕩器中振蕩固定3～5小時，即得。

所述酪氨酸酶和色氨酸酶為市售哺乳動物酪氨酸酶和色氨酸酶。優選的，所述酪氨酸酶和色氨酸酶為市售人酪氨酸酶和色氨酸酶或大鼠酪氨酸酶和色氨酸酶。