[發(fā)明專利]一種循環(huán)腫瘤細胞快速檢測試劑盒

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201611022548.1
• 申請日: 2016-11-15
• 公開（公告）號: CN106596938B
• 公開（公告）日: 2019-01-25
• 發(fā)明（設計）人: 張志立;黃俊;郭驍;趙平鋒;盧彥羽;張全;胡樹軍
• 申請（專利權）人: 武漢海吉力生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/574
• 分類號: G01N33/574;G01N15/14
• 代理公司: 北京匯澤知識產權代理有限公司 11228
• 代理人: 程殿軍;張瑾

本發(fā)明公開了一種循環(huán)腫瘤細胞快速檢測試劑盒，組成包括：細胞密度梯度分離液、多孔隔膜分離管、5mL容積的離心管、表皮類腫瘤標志物抗體和間質類腫瘤標志物抗體。本試劑盒利用密度梯度離心法去除了血液中絕大多數的紅細胞及白細胞背景干擾，同時對血液中的循環(huán)腫瘤細胞進行富集。之后使用以表皮類和間質類兩大類共4種腫瘤標志物的熒光抗體對循環(huán)腫瘤細胞進行熒光標記，最后在通用的流式細胞儀中完成對循環(huán)腫瘤細胞檢出并計數，本發(fā)明的試劑盒考慮到了腫瘤細胞的表皮間質轉換過程，增加了捕獲間質類的循環(huán)腫瘤細胞，增加了檢測陽性符合率，精確度高，方便快速，成本較低且耗時較短，檢測計數由流式細胞儀自動完成，重復性強。

技術領域

本發(fā)明涉及腫瘤預后檢測技術領域，具體涉及一種循環(huán)腫瘤細胞快速檢測試劑盒。

背景技術

在我國，惡性腫瘤的發(fā)病率呈逐年上升趨勢，現今已經成為嚴重影響人們健康的公共衛(wèi)生問題。由于對腫瘤的生物學特性尚未完全明確，除了傳統(tǒng)的影像學和病理學方法外，目前在臨床上缺乏簡單、快速、非入侵性地對腫瘤的手術或放化療的預后進行評價的方法，以及對病人的復發(fā)和病情進展進行追蹤的有效手段。

循環(huán)腫瘤細胞(CTCs)是惡性腫瘤原發(fā)灶或轉移灶脫落進入外周血循環(huán)的腫瘤細胞，它具有腫瘤特異性抗原、基因特征等生物學特性，并且能在外周血中長期存活，它們是腫瘤組織遠端轉移的重要途徑和細胞來源。循環(huán)腫瘤細胞的檢測和分析是最近幾年中腫瘤領域研究的一個熱點問題，目前已經有大量的文獻證明了腫瘤病人血液中的循環(huán)腫瘤細胞數量的多少和病人腫瘤惡性程度、病情進展以及預后的總生存期有著明確的相關性，并且證實血液中的循環(huán)腫瘤細胞和腫瘤原發(fā)病灶腫瘤組織在耐藥性、突變位點等生物學特性方面存在較高的一致性。因此臨床上循環(huán)腫瘤細胞的檢測對明確轉移過程、輔助診斷、監(jiān)測療效、指導個體化治療、判斷預后等方面具有重要的臨床應用價值。同時這種體外診斷的方法簡單快速并且對病人沒有創(chuàng)傷，能夠有效解決地腫瘤病人預后評價困難的問題。

循環(huán)腫瘤細胞在血液里是非常稀少的，5mL全血中有約十億個紅細胞(RBCs)和約五百萬個白細胞(WBCs)，僅有數個到幾十個循環(huán)腫瘤細胞。使得在如此大的背景下獲得純的循環(huán)腫瘤細胞具有極大的挑戰(zhàn)。

大部分循環(huán)腫瘤細胞檢測技術涉及去除RBCs的全血前處理，比如RBCs裂解液處理等，這樣的處理會造成部分循環(huán)腫瘤細胞損失，并且往往存在分析過程復雜、效率低、特異性和靈敏度低等缺陷。目前，臨床上應用的獲得美國FDA和中國藥監(jiān)局批準的唯一的檢測CTC的方法是強生公司的CellSearch方法，這是一種使用表皮細胞特異性蛋白作為腫瘤標志物，同時利用免疫磁珠的方法將循環(huán)腫瘤細胞富集并最后進行免疫熒光顯微觀察檢測的一種半自動的循環(huán)腫瘤細胞計數方法。這種方法存在檢測陽性符合率較低的問題。同時由于其系統(tǒng)較為昂貴、單個檢測樣本成本較高、耗時較長，應用較為困難。因此，臨床上迫切需要一種特異性靈敏度高、成本低且操作簡單的循環(huán)腫瘤細胞檢測技術。

發(fā)明內容

為了解決現有循環(huán)腫瘤細胞檢測技術的缺陷，本發(fā)明提供了一種從外周血中同時提取循環(huán)腫瘤細胞檢測試劑盒。

本發(fā)明的技術方案具體如下：

一種循環(huán)腫瘤細胞快速檢測試劑盒，組成包括：

細胞密度梯度分離液；

多孔隔膜分離管；

5mL容積的離心管；

表皮類腫瘤標志物抗體；

間質類腫瘤標志物抗體。

本試劑盒利用密度梯度離心法去除了血液中絕大多數的紅細胞及白細胞背景干擾，同時對血液中的循環(huán)腫瘤細胞進行富集。之后使用以表皮類和間質類兩大類共4種腫瘤標志物的熒光抗體對循環(huán)腫瘤細胞進行熒光標記，最后在通用的流式細胞儀中完成對循環(huán)腫瘤細胞檢出并計數，本發(fā)明的試劑盒考慮到了腫瘤細胞的表皮間質轉換過程，增加了捕獲間質類的循環(huán)腫瘤細胞，增加了檢測陽性符合率，精確度高。