[發明專利]細胞?生物支架復合體及其3D打印成形方法

在審

• 申請號: 201611021306.0
• 申請日: 2016-11-15
• 公開（公告）號: CN106693057A
• 公開（公告）日: 2017-05-24
• 發明（設計）人: 趙勁民;鄭立;陸真慧;吳洋;楊星辰
• 申請（專利權）人: 廣西醫科大學
• 主分類號: A61L27/38
• 分類號: A61L27/38;A61L27/42;A61L27/48;A61L27/50;B29C64/112;B33Y10/00
• 代理公司: 北京輕創知識產權代理有限公司11212
• 代理人: 楊立,陳振玉

1.細胞-生物支架復合體，其特征在于，包括生物支架和設置于生物支架上的細胞-生物凝膠混懸液。

2.根據權利要求1所述的細胞-生物支架復合體，其特征在于，所述生物支架包括生物高分子材料、天然生物材料和無機材料的一種或多種的組合，生物高分子材料包括磷酸鈣、聚己內酯、聚四氟乙烯和乳酸-羥基乙酸共聚物的一種或多種的組合，天然生物材料包括明膠和海藻酸鈉中一種或兩種的組合，無機材料包括硫酸鈣、硼硅酸和納米羥基磷灰石的一種或多種的組合。

3.根據權利要求1所述的細胞-生物支架復合體，其特征在于，所述細胞-生物凝膠混懸液包括細胞和生物凝膠液，細胞為成骨細胞或角膜基質細胞，且生物凝膠液包括重量份為12-16份的冰醋酸、20-25份的殼聚糖、10-15份的氫氧化鈉和8-12份的三乙醇胺。

4.細胞-生物支架復合體的3D打印成形方法，其特征在于，包括以下步驟：

S1：將生物支架的制備原料混合均勻，用生物打印機的支架打印噴頭將混合均勻的生物支架的制備原料逐層加工為與組織器官的實際缺損狀況相似的生物支架；

S2：將殼聚糖粉碎，然后將其浸泡于冰醋酸中70-80h，每5-8h充分振蕩一次，接著以11000-13000rpm/min的速度離心，取上清液；將氫氧化鈉加入上清液中，調節其PH值為6.5-7.5，然后再次以11000-13000rpm/min的速度離心，去除上清液，接著加入冰醋酸和三乙醇胺，混合均勻后，制得生物凝膠液；

S3：用冰醋酸將生物凝膠液稀釋到所需蛋白濃度，然后加入氫氧化鈉，調節其PH值為8-8.7，接著將重量份為30-35份的培養液和25-30份的血清加入調制后的生物凝膠液中，混合均勻后，得到預凝生物凝膠液，然后將預凝生物凝膠液和細胞放入離心管中，用滴管吹打充分混勻，制得細胞-生物凝膠混懸液；

S4：將細胞-生物凝膠混懸液用生物打印機的細胞打印噴頭噴射在生物支架上，然后將生物支架置入培養皿中，接著向培養皿中加入所需培養液，再將培養皿放入旋轉式三維培養器內培養，兩天換液一次，培養十天后，制得細胞-生物支架復合體。

5.根據權利要求4所述的細胞-生物支架復合體的3D打印成形方法，其特征在于，所述S2中，將殼聚糖粉碎，然后將其浸泡于冰醋酸中72-78h，每6-7h充分振蕩一次，接著以11500-12500rpm/min的速度離心，取上清液；將氫氧化鈉加入上清液中，調節其PH值為6.7-7.3，然后再次以11500-12500rpm/min的速度離心，去除上清液，接著加入冰醋酸和三乙醇胺，混合均勻后，制得生物凝膠液。

6.根據權利要求4所述的細胞-生物支架復合體的3D打印成形方法，其特征在于，所述S3中，用冰醋酸將生物凝膠液稀釋到所需蛋白濃度，然后加入氫氧化鈉，調節其PH值為8.2-8.5，接著將重量份為31-34份的培養液和26-28份的血清加入調制后的生物凝膠液中，混合均勻后，得到預凝生物凝膠液，然后將預凝生物凝膠液和細胞放入離心管中，用滴管吹打充分混勻，制得細胞-生物凝膠混懸液。