[發明專利]一種擬南芥管狀分子體外誘導培養的方法

有效

• 申請號: 201611019431.8
• 申請日: 2016-11-18
• 公開（公告）號: CN106613965B
• 公開（公告）日: 2018-08-10
• 發明（設計）人: 蔣蘇;李師鵬;曹子誼;趙淑舉;劉振東;白如水
• 申請（專利權）人: 齊魯師范學院
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 濟南千慧專利事務所(普通合伙企業) 37232
• 代理人: 王寬

本發明公開了一種擬南芥管狀分子體外誘導培養的方法，步驟如下：(1)制備擬南芥愈傷組織；(2)在愈傷組織增殖培養基上對擬南芥愈傷組織進行擴繁培養；(3)將擴繁后的擬南芥愈傷組織進行懸浮培養，獲得分散性良好的擬南芥愈傷組織懸浮培養系；(4)將擬南芥愈傷組織懸浮培養系采用細胞篩進行過濾，過濾后的單細胞培養系轉入擬南芥管狀分子體外誘導液體培養基中，進行誘導培養，誘導擬南芥愈傷組織單細胞進行分化，在體外形成管狀分子。本發明的方法在擬南芥材料上適用范圍更廣泛、取材更簡易、培養時間縮短、獲得細胞分散性更好。

技術領域

本發明涉及一種擬南芥管狀分子體外誘導培養的方法，屬于植物組織培養技術領域。

背景技術

生物質能源的開發是應對能源危機的有效途徑。細胞壁成分是地球上產量最高的生物質，細胞壁的主要成分有纖維素、半纖維素和木質素，其中木質素嚴重阻礙纖維素和半纖維素的有效利用，因此，對細胞壁形成的機理研究和成分改造有利于生物質能源的高效利用。

管狀分子是植物木質部組織的主要功能結構——包括管胞和導管，負責根吸收的水分向地上部分長距離的運輸。管狀分子側壁的紋狀加厚是管狀分子的主要結構特征，這一結構為導管長距離的運輸功能提供重要機械支持作用。管狀分子是由根尖分生組織產生的導管前體細胞分化而來的，其細胞分化過程由細胞縱向伸長、次生壁紋狀加厚和穿孔板形成3個連續階段組成。次生壁在管狀分子側壁有規律的紋狀加厚受到胞內機制的精密控制，次生壁物質的沉積只發生在側壁而不能發生在兩端(穿孔板部位)，次生壁在側壁上不是均勻累積而是呈規則的紋狀加厚，管狀分子的這一加厚模式稱之為次生壁物質的極性沉積。因此管狀分子是研究次生壁物質累積的一個良好模型。

由于管狀分子位于植物體內部，且處于正在發育過程中的管狀分子相對數量較少，對發育中的管狀分子進行研究取材極為困難，因此對管狀分子進行體外誘導培養成為次生壁成分累積研究的一個重要手段。但目前關于擬南芥管狀分子體外誘導培養的報道較少，而且多存在取材復雜、培養時間相對較長、細胞分散性欠佳等問題。因此，構建新的擬南芥管狀分子體外誘導培養體系，對于次生壁成分積累的研究具有十分重要的意義。

發明內容

針對上述現有技術，本發明的目的是提供一種擬南芥管狀分子體外誘導培養的方法，本發明的方法在擬南芥材料上適用范圍更廣泛、取材更簡易、培養時間縮短、獲得細胞分散性更好。

為實現上述目的，本發明采用下述技術方案：

一種擬南芥管狀分子體外誘導培養的方法，步驟如下：

(1)制備擬南芥愈傷組織；

(2)在愈傷組織增殖培養基上對擬南芥愈傷組織進行擴繁培養；

(3)將擴繁后的擬南芥愈傷組織進行懸浮培養，獲得分散性良好的擬南芥愈傷組織懸浮培養系；

(4)將擬南芥愈傷組織懸浮培養系采用細胞篩進行過濾，過濾后的單細胞培養系轉入擬南芥管狀分子體外誘導液體培養基中，進行誘導培養，誘導擬南芥愈傷組織單細胞進行分化，在體外形成管狀分子。

步驟(1)中，擬南芥愈傷組織的制備方法為：將萌發后10～14天苗齡擬南芥幼苗整株切碎接入愈傷組織誘導培養基中，23～25℃暗培養，14～16天繼代一次，共誘導培養28～32天，獲得擬南芥愈傷組織。

所述愈傷組織誘導培養基是在B5基本培養基中添加20g/L的蔗糖、0.5mg/L的2,4-D，0.05mg/L的6-BA，6～8g/L的瓊脂，調節pH為5.8。

步驟(1)中，所述擬南芥幼苗的培養方法為：挑選成熟飽滿的擬南芥種子，用質量濃度為2％次氯酸鈉滅菌20min，無菌水沖洗4次后，播種于MS基本培養基上。

步驟(2)中，所述愈傷組織增殖培養基是在MS基本培養基中添加30g/L的蔗糖、1mg/L的2,4-D，6～8g/L的瓊脂，調節pH為5.8。