[發明專利]一種酪氨酸磷酸酶抗體化學發光免疫檢測試劑盒及其制備方法

在審

• 申請號: 201611018794.X
• 申請日: 2016-11-21
• 公開（公告）號: CN107044977A
• 公開（公告）日: 2017-08-15
• 發明（設計）人: 祝亮;楊永宏;王剛;王棟凱;劉星
• 申請（專利權）人: 深圳市亞輝龍生物科技股份有限公司
• 主分類號: G01N21/76
• 分類號: G01N21/76;G01N33/573;G01N33/553;G01N33/543;G01N33/531
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技術領域

本發明涉及體外診斷免疫檢測領域，具體地，本發明提供了一種酪氨酸磷酸酶抗體化學發光免疫檢測試劑盒及其制備方法。

背景技術

酪氨酸磷酸酶是一種胰島細胞瘤相關蛋白（酪氨酸磷酸酶樣分子家族的一個成員），是胰島細胞抗體（ICA）的主要組成成份之一，結構上分為4部分：信號肽、胞外結構、單一跨膜結構域及胞內結構域。酪氨酸磷酸酶抗體（IA-2A）作為一種重要的胰島自身抗體，兒童和青少年患者中出現的頻率為50-70%，成年人患者中出現的頻率為30-50%。IA-2和GAD一樣I型糖尿病主要抗原，疾病的進程與該抗體的低度有關。

臨床檢測酪氨酸磷酸酶抗體的常見方法有間接免疫熒光法、酶聯免疫吸附法，但這些方法都存在著一些不足之處。

一、間接免疫熒光法

該法的基本原理是用特異性的抗體與載玻片中的抗原結合后形成抗原抗體復合物，繼用熒光抗體與抗原抗體復合物結合，形成抗原抗體熒光復合物。在熒光顯微鏡下，根據復合物的發光情況來確定所檢測的抗體。該方法評價：由于結合在抗原抗體復合物上的熒光抗體增多，發出的熒光亮度強，因而其敏感性強。但是其不足也是明顯的：

(1) 操作相對復雜，需要價格較昂貴的熒光顯微鏡，在很多基層醫院難以推廣，也不太適用于標本量較多的實驗室；

(2) 熒光測定中的本底較高，只能進行定性檢測，熒光免疫技術用于定量測定有一定困難；

(3) 結果判定需要有經驗的專業人員，分析結果的客觀性不足；

二、酶聯免疫吸附法

酶聯免疫吸附法(ELISA) 被廣泛應用，但該方法也存在著下述的不足之處：

(1) 使用12×8型、6×8型、8×12型或整板型96孔專用微孔板作為抗原包被用具和反應容器，在使用時只能分成12批次、6批次、8批次或整板一次使用，無法進行獨立的、單人份的檢測；

(2) 定量測定所用的試劑種類較多，每一種檢測試劑都要用試劑瓶來盛裝，并且每使用一種試劑時都需要更換吸液嘴來分別加注到微孔板的微孔中，不但試劑瓶種類多，加注試劑的操作也極為繁瑣；

(3) 缺少對檢測信息的相應標注，只能通過查看試劑盒外包裝盒的標識才能了解或知悉檢測試劑的生產批號及有效期信息，而且所知悉的信息在檢測過程中不受控，具有很大的隨意性；

(4) 檢測試劑在檢測過程中處于開放的空間，容易引起各種試劑之間的交叉污染而影響檢測結果的準確性；

(5) 檢測過程多采用手工操作，試劑或樣本的加量不很精確，操作過程極為繁瑣和復雜，容易發生操作差錯，檢測結果的準確度和精密度較差。

發明內容

目前酪氨酸磷酸酶抗體檢測技術存在以下缺點：檢測成本高、檢測靈敏度低、檢測線性范圍窄、重現性低、不能定量、操作復雜等。

本發明正是為了克服以上所述缺點，公開了一種檢測成本低、靈敏度高、檢測線性范圍廣、重現性高、可以定量、操作簡單的酪氨酸磷酸酶抗體試劑盒及其制備方法。本發明首先制備化學發光免疫分析試劑盒，主要包括：酪氨酸磷酸酶包被的磁顆粒、酪氨酸磷酸酶包被的吖啶酯以及酪氨酸磷酸酶抗體定標品；然后利用全自動化學發光免疫分析儀對定標品進行檢測，繪制標準曲線，內置于電腦軟件，測試實際樣本，根據樣本發光值計算樣本濃度；最后對酪氨酸磷酸酶抗體全自動化學發光免疫分析系統進行性能（靈敏度、線性、精密度、干擾性）的評價。

本發明與目前技術相比，具有以下優點：

1、本發明選擇吖啶酯作為標記材料，并應用于化學發光免疫分析系統，該發光體系為直接化學發光，與傳統的酶促化學發光相比，該反應不需要酶的參與，更加節約成本；

2、本發明選用的吖啶酯化學發光免疫分析系統檢測靈敏度高，能夠達到0.08 IU/mL，相比其它的酪氨酸磷酸酶抗體檢測方法靈敏度至少提高了8倍；

3、本發明選用的吖啶酯化學發光免疫分析系統線性范圍寬，能達到10-4000 IU/mL，其它的酪氨酸磷酸酶抗體化學發檢測方法的檢線性范圍為20-2000 IU/mL；

4、本發明選用的吖啶酯化學發光免疫分析系統重復性高，批內及批間差均在5%以內，這是其它化學發光免疫分析系統難以達到的；

5、本發明的化學發光免疫分析系統已實現樣本的定量，通過內置標準曲線到測試軟件，只需測試樣本就可直接得到樣本的濃度值；

6、本發明的化學發光免疫分析系統已實現全自動化，試劑及樣本的添加全有儀器完成，操作更加簡便，減少了人為的誤差。

附圖說明