[發(fā)明專利]一種抗髓過氧化物酶抗體IgG化學發(fā)光免疫測定試劑盒及其制備方法

在審

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• 申請日: 2016-11-21
• 公開（公告）號: CN107966563A
• 公開（公告）日: 2018-04-27
• 發(fā)明（設計）人: 李江;徐向紅;王棟凱;鄭燕萍;馬曉雯
• 申請（專利權）人: 深圳市亞輝龍生物科技股份有限公司
• 主分類號: G01N33/573
• 分類號: G01N33/573;G01N33/577;G01N33/532
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• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發(fā)明涉及體外診斷免疫檢測領域，具體地，本發(fā)明提供了一種化學發(fā)光免疫檢測抗髓過氧化物酶抗體IgG試劑盒及其制備方法。

背景技術

髓過氧化物酶（myeloperoxidase，MPO）是糖基化的血紅素蛋白，主要存在于髓系細胞（主要是嗜中性粒細胞和單核細胞）的嗜苯胺藍顆粒中，外界刺激可導致中性粒細胞聚集，釋放MPO，血液中95％的MPO是由活化的嗜中性粒細胞脫顆粒釋放入血的。MPO是由2 個亞單位聚合而成的二聚體，每個亞單位又由一條重鏈（α鏈）和一條輕鏈（β鏈）構成，2個亞單位在α鏈處由1個二硫鍵相連。

MPO水平與中性粒細胞激活程度之間存在極顯著的相關性，是中性粒細胞的活化標志物當前臨床上對急性冠脈綜合征的診斷與評估主要應用心肌酶譜等指標。此類指標的水平通常會在心肌發(fā)生實質損傷后發(fā)生明顯升高，因此，該類指標不能對心血管疾病的發(fā)生提供早期預警。MPO抗體的測定可用于診斷自身免疫性血管炎等疾病，同時對于監(jiān)視治療和病情追蹤以及判斷預后等有重要意義。

臨床檢測抗髓過氧化物酶抗體IgG的主要方法為酶聯(lián)免疫吸附法，但該方法存在著下述的不足之處：

（1）使用12×8型、6×8型、8×12型或整板型96孔專用微孔板作為抗原包被用具和反應容器，在使用時只能分成12批次、6批次、8批次或整板一次使用，無法進行獨立的、單人份的檢測；

（2）定量測定所用的試劑種類較多，每一種檢測試劑都要用試劑瓶來盛裝，并且每使用一種試劑時都需要更換吸液嘴來分別加注到微孔板的微孔中，不但試劑瓶種類多，加注試劑的操作也極為繁瑣；

（3）缺少對檢測信息的相應標注，只能通過查看試劑盒外包裝盒的標識才能了解或知悉檢測試劑的生產(chǎn)批號及有效期信息，而且所知悉的信息在檢測過程中不受控，具有很大的隨意性；

（4）檢測試劑在檢測過程中處于開放的空間，容易引起各種試劑之間的交叉污染而影響檢測結果的準確性；

（5）檢測過程多采用手工操作，試劑或樣本的加量不很精確，操作過程極為繁瑣和復雜，容易發(fā)生操作差錯，檢測結果的準確度和精密度較差；

（6）在檢測項目成套試劑的數(shù)量配置及使用上均為項目數(shù)×48/96人份，如果需要檢測10個項目，則試劑的配置及使用數(shù)須為10×48/96人份，如果只有一份樣本需要檢測10個不同的項目，也需要配置10×48/96人份的試劑，存在著不夠經(jīng)濟合理的缺點。

發(fā)明內(nèi)容

目前抗髓過氧化物酶抗體IgG檢測技術存在以下缺點：檢測成本高、檢測靈敏度低、檢測線性范圍窄、重現(xiàn)性低、不能定量、操作復雜等。

本發(fā)明正是為了克服以上所述缺點，公開了一種檢測成本低、靈敏度高、檢測線性范圍廣、重現(xiàn)性高、可以定量、操作簡單的抗髓過氧化物酶抗體IgG試劑盒及其制備方法。本發(fā)明首先制備化學發(fā)光免疫分析試劑盒，主要包括：抗髓過氧化物酶抗體IgG單克隆抗體包被的磁顆粒、抗髓過氧化物酶抗體IgG單克隆抗體包被的吖啶酯以及抗髓過氧化物酶抗體IgG定標品；然后利用全自動化學發(fā)光免疫分析儀對定標品進行檢測，繪制標準曲線，內(nèi)置于電腦軟件，測試實際樣本，根據(jù)樣本發(fā)光值計算樣本濃度；最后對抗髓過氧化物酶抗體IgG全自動化學發(fā)光免疫分析系統(tǒng)進行性能（靈敏度、線性、精密度、干擾性）的評價。

本發(fā)明與目前技術相比，具有以下優(yōu)點：

1、本發(fā)明選擇吖啶酯作為標記材料，并應用于化學發(fā)光免疫分析系統(tǒng)，該發(fā)光體系為直接化學發(fā)光，與傳統(tǒng)的酶促化學發(fā)光相比，該反應不需要酶的參與，更加節(jié)約成本；

2、本發(fā)明選用的吖啶酯化學發(fā)光免疫分析系統(tǒng)檢測靈敏度高，能夠達到1.5 AU/mL；

3、本發(fā)明選用的吖啶酯化學發(fā)光免疫分析系統(tǒng)線性范圍寬，能達到1.5-300 AU/mL；

4、本發(fā)明選用的吖啶酯化學發(fā)光免疫分析系統(tǒng)重復性高，批內(nèi)及批間差均在5%以內(nèi)，這是其它化學發(fā)光免疫分析系統(tǒng)難以達到的；

5、本發(fā)明的化學發(fā)光免疫分析系統(tǒng)已實現(xiàn)樣本的定量，通過內(nèi)置標準曲線到測試軟件，只需測試樣本就可直接得到樣本的濃度值；

6、本發(fā)明的化學發(fā)光免疫分析系統(tǒng)已實現(xiàn)全自動化，試劑及樣本的添加全有儀器完成，操作更加簡便，減少了人為的誤差。

附圖說明

圖1為實施例3得到的抗髓過氧化物酶抗體IgG標準曲線圖。