[發(fā)明專利]一種抗腎小球基底膜抗體IgG化學(xué)發(fā)光免疫測定試劑盒及其制備方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201611018767.2
• 申請日: 2016-11-21
• 公開（公告）號: CN106855570A
• 公開（公告）日: 2017-06-16
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 郝建華;徐向紅;王棟凱;鄭燕萍;馬曉雯
• 申請（專利權(quán)）人: 深圳市亞輝龍生物科技股份有限公司
• 主分類號: G01N33/535
• 分類號: G01N33/535;G01N33/543;G01N33/577;G01N21/76
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種抗腎小球基底膜抗體IgG化學(xué)發(fā)光免疫測定試劑盒，所述試劑盒包括：抗腎小球基底膜抗體IgG單克隆抗體包被的-納米磁微球、化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物、化學(xué)發(fā)光底物液、抗腎小球基底膜抗體IgG定標(biāo)品。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述抗腎小球基底膜抗體IgG單克隆抗體包被的固相載體為磁微粒。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述抗腎小球基底膜抗體IgG單克隆抗體包被的固相載體為羧基化的粒徑為0.05-1um磁微粒。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物為吖啶酯、吖啶酯磺酰胺、吖啶酯甲苯磺酰胺、吖啶酯對甲基磺酰胺、吖啶酯三氟甲基磺酰胺。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物優(yōu)選吖啶酯。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述化學(xué)發(fā)光底物液包括化學(xué)發(fā)光激發(fā)液、化學(xué)發(fā)光預(yù)激發(fā)液。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述化學(xué)發(fā)光預(yù)激發(fā)液為質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.005% ~ 0.5%的雙氧水(H₂O₂)溶液，激發(fā)液為0.005mol/L ~ 0.025mol/L的氫氧化鈉(NaOH)溶液。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述抗腎小球基底膜抗體IgG定標(biāo)品為用標(biāo)準(zhǔn)品緩沖液將抗腎小球基底膜抗體IgG配制成濃度為0 AU/mL、32.5 AU/mL、65 AU/mL、130 AU/mL、260 AU/mL、520 AU/mL，4 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒的制備方法，其特征在于包括抗腎小球基底膜抗體IgG單克隆抗體包被的磁微粒的制備、抗腎小球基底膜抗體IgG衍生物標(biāo)記的吖啶酯的制備、化學(xué)發(fā)光底物液的制備、抗腎小球基底膜抗體IgG定標(biāo)品的制備。

10.根據(jù)權(quán)利要求1和權(quán)利要求9所述試劑盒的制備方法，其特征在于包括以下步驟：

1）抗腎小球基底膜抗體IgG單克隆抗體包被的磁微粒的制備：

取羧基化的納米磁珠懸浮液，磁分離去上清， MES緩沖液重懸，加入EDC水溶液，活化磁珠表面羧基，加入抗腎小球基底膜抗體IgG單克隆抗體，室溫下混懸2-10 h，磁分離，去除上清， Tris緩沖液重懸，得到抗腎小球基底膜抗體IgG單克隆抗體包被的磁微粒；可選的，羧基化納米磁珠直徑為0.1μm ~ 2.0μm；

MES緩沖液濃度為10mM ~ 100mM，pH 5.5 ~ 8.5；

2）抗腎小球基底膜抗體IgG衍生物標(biāo)記的吖啶酯的制備：

取抗腎小球基底膜抗體IgG衍生物，加入碳酸鹽緩沖液，混勻，然后加入吖啶酯混勻，室溫下避光反應(yīng)，1-2 h后取出，離心脫鹽柱脫鹽處理，脫鹽過程中首先分別用純凈水及TBS緩沖液進(jìn)行處理，最后加入得到的抗腎小球基底膜抗體IgG衍生物標(biāo)記的吖啶酯溶液，收集離心管中的液體至保存管得到抗腎小球基底膜抗體IgG衍生物標(biāo)記的吖啶酯；

3）抗腎小球基底膜抗體IgG定標(biāo)品的制備：

用標(biāo)準(zhǔn)品緩沖液將抗腎小球基底膜抗體IgG配置成濃度為0 AU/mL、32.5 AU/mL、65 AU/mL、130 AU/mL、260 AU/mL、520 AU/mL，分裝凍干，4 ℃保存?zhèn)溆茫?/p>

4）化學(xué)發(fā)光預(yù)激發(fā)液的制備：

量取1.0升純化水，依次加入0.5 ~100uL質(zhì)量分?jǐn)?shù)為20%的雙氧水(H₂O₂)、0.5 ~ 5克防腐劑、0.5 ~ 5克表面活性劑，搖勻后避光存放；可選的，防腐劑為商品化疊氮化鈉、PC300，表面活性劑為吐溫20、吐溫80、Triton X100、Triton 405；

5）化學(xué)發(fā)光激發(fā)液的制備：

量取1.0升純化水，依次加入0.2 ~ 1克氫氧化鈉、0.5 ~ 5克防腐劑、0.5 ~ 5克表面活性劑，搖勻后避光存放；

可選的，防腐劑為商品化疊氮化鈉、PC300，表面活性劑為吐溫20、吐溫80、Triton X100、Triton 405。