[發(fā)明專利]一種胃泌素釋放肽前體化學(xué)發(fā)光免疫檢測試劑盒及其制備方法

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• 申請日: 2016-11-21
• 公開（公告）號: CN106855572A
• 公開（公告）日: 2017-06-16
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 龍峰;祝亮;牛越峰;高旭全;彭成
• 申請（專利權(quán)）人: 深圳市亞輝龍生物科技股份有限公司
• 主分類號: G01N33/543
• 分類號: G01N33/543;G01N33/577
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及體外診斷免疫檢測領(lǐng)域，具體地，本發(fā)明提供了一種化學(xué)發(fā)光免疫檢測胃泌素釋放肽前體試劑盒及其制備方法。

背景技術(shù)

肺癌主要分為小細胞肺癌（SCLC）和非小細胞肺癌（NSCLC）。 NSCLC 約占肺癌的80%，包括大細胞癌、腺癌和鱗癌。相比NSCLC，由于SCLC 僅占肺癌的15 － 20%，因此不管是診斷還是治療領(lǐng)域，SCLC 獲得的關(guān)注度都較低。但SCLS 卻是一種惡性化程度更高、病因更復(fù)雜的腫瘤，具有快速和侵襲性生長的特點，易發(fā)生廣泛性壞死和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。

胃泌素釋放肽前體（ProGRP）作為小細胞肺癌（SCLC）新的標(biāo)記物，具有敏感性高、特異性強的特點，并可準(zhǔn)確反映小細胞肺癌（SCLC）病情及對化療的反應(yīng)。因此，將對小細胞肺癌（SCLC）的診斷具有較高敏感度，特異度和準(zhǔn)確率的胃泌素釋放肽前體（ProGRP）作為提示小細胞肺癌（SCLC）的血清腫瘤標(biāo)志物，可為臨床鑒定小細胞肺癌（SCLC）提供參考依據(jù)。胃泌素釋放肽前體作為血清腫瘤標(biāo)志物，不僅可用于小細胞肺癌（SCLC）的早期診斷，還有助于用于預(yù)后評估。

目前臨床檢測胃泌素釋放肽前體的常見方法有酶聯(lián)免疫吸附法、放射免疫分析法、酶促化學(xué)發(fā)光法，但這些方法都存在著一些不足之處。

一、酶聯(lián)免疫吸附法

酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA) 被廣泛應(yīng)用，但該方法也存在著下述的不足之處：

(1) 使用12×8型、6×8型、8×12型或整板型96 孔專用微孔板作為抗原包被用具和反應(yīng)容器，在使用時只能分成12 批次、6 批次、8 批次或整板一次使用，無法進行獨立的、單人份的檢測；

(2) 定量測定所用的試劑種類較多，每一種檢測試劑都要用試劑瓶來盛裝，并且每使用一種試劑時都需要更換吸液嘴來分別加注到微孔板的微孔中，不但試劑瓶種類多，加注試劑的操作也極為繁瑣；

(3) 缺少對檢測信息的相應(yīng)標(biāo)注，只能通過查看試劑盒外包裝盒的標(biāo)識才能了解或知悉檢測試劑的生產(chǎn)批號及有效期信息，而且所知悉的信息在檢測過程中不受控，具有很大的隨意性；

(4) 檢測試劑在檢測過程中處于開放的空間，容易引起各種試劑之間的交叉污染而影響檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性；

(5) 檢測過程多采用手工操作，試劑或樣本的加量不很精確，操作過程極為繁瑣和復(fù)雜，容易發(fā)生操作差錯，檢測結(jié)果的準(zhǔn)確度和精密度較差；

(6) 在檢測項目成套試劑的數(shù)量配置及使用上均為項目數(shù)×48/96人份，如果需要檢測10 個項目，則試劑的配置及使用數(shù)須為10×48/96人份，如果只有一份樣本需要檢測10 個不同的項目，也需要配置10×48/96人份的試劑，存在著不夠經(jīng)濟合理的缺點。

二、放射免疫分析法

放射免疫分析方法放射性污染大、加樣步驟繁瑣、操作復(fù)雜、操作時間長、測定結(jié)果不穩(wěn)定、試劑保存時間短、試劑盒操作自動化程度低、配套儀器價格昂貴等不足之處。

三、化學(xué)發(fā)光法

化學(xué)發(fā)光法按發(fā)光原理可分為直接化學(xué)發(fā)光和酶促化學(xué)發(fā)光。

酶促化學(xué)發(fā)光主要有辣根過氧化物酶（HRP）和堿性磷酸酶兩種，但都有一定的局限性，辣根過氧化物酶主要缺點為：魯米諾在沒有辣根過氧化物酶存在情況下，也會被H2O2氧化自身發(fā)光，本底相對較高，影響信噪比，反應(yīng)動力學(xué)復(fù)雜，影響因素多，結(jié)果不夠穩(wěn)定，要得到靈敏度高且平臺期長的底物不容易。堿性磷酸酶主要缺點為：底物達到平臺期的時間長，底物成本高，導(dǎo)致檢測成本高，患者負擔(dān)重。

吖啶酯作為標(biāo)記物的直接化學(xué)發(fā)光相比酶促化學(xué)發(fā)光具有明細優(yōu)勢，主要表現(xiàn)在：反應(yīng)不需要催化劑，只要堿性環(huán)境即可進行，反應(yīng)迅速，背景發(fā)光低，信噪比高，干擾因素少，試劑穩(wěn)定性好，可以兩點定標(biāo)，體系簡單，激發(fā)液成本低，吖啶酯易與蛋白質(zhì)聯(lián)結(jié)，且聯(lián)結(jié)后光子產(chǎn)率不減少。

發(fā)明內(nèi)容

目前胃泌素釋放肽前體檢測技術(shù)存在以下缺點：檢測成本高、檢測靈敏度低、檢測線性范圍窄、重現(xiàn)性低、不能定量、操作復(fù)雜等。