[發(fā)明專利]酸棗仁湯多糖提取物、制備方法及其應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201611018158.7
• 申請日: 2016-11-20
• 公開（公告）號: CN108084286A
• 公開（公告）日: 2018-05-29
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 石佳媛
• 申請（專利權(quán)）人: 石佳媛
• 主分類號: C08B37/00
• 分類號: C08B37/00;A61P25/20;A61K36/8964;A61K36/725;A61K36/484;A61K36/236;A61K36/076
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本發(fā)明公開了一種酸棗仁湯多糖提取物、制備方法及在制備鎮(zhèn)靜、催眠藥物中的應(yīng)用，該工藝簡單、成本低廉、適于工業(yè)化制備，可用于分離純化酸棗仁湯多糖，為酸棗仁鎮(zhèn)靜催眠藥物研發(fā)奠定基礎(chǔ)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于中藥制藥領(lǐng)域，具體涉及一種酸棗仁湯多糖提取物制備方法及其在鎮(zhèn)靜、催眠藥物中的應(yīng)用，該工藝簡單、成本低廉、適于工業(yè)化制備。

技術(shù)背景

目前多糖提取方法還比較落后，主要采用傳統(tǒng)的水提醇沉法，由于多糖與色素結(jié)合緊密，并含有少量黏性物質(zhì)，因此在提取分離過程中使成本增加，不易產(chǎn)業(yè)化。膜法作為一種新型的分離技術(shù)，不但具有能耗低、單級分離效果高、工藝簡單，可在室溫或低溫下操作，而且用于中藥分離、純化時(shí)所得制品收率高、純度好。

發(fā)明內(nèi)容

發(fā)明提供了一種酸棗仁湯多糖提取物，該提取物中多糖分子量小于50kDa，具有良好的鎮(zhèn)靜、催眠活性。

本發(fā)明還提供了制備上述酸棗仁湯多糖提取物的方法，其步驟如下：

(1)稱取酸棗仁湯各組成藥味。

(2)用4-40倍量，體積濃度為50-95％乙醇回流提取，棄去乙醇液。

(3)殘?jiān)?jīng)干燥處理，加5-10倍量水浸提兩次(30～70℃)，每次0.5-2h。

(4)提取液靜置過夜后將上清液離心，上清液用截留分子量為50kDa的超濾膜進(jìn)行超濾處理，得到酸棗仁湯多糖超濾液。

(5)向多糖超濾液中加入體積濃度為60-90％乙醇，冷藏過夜，離心，沉淀干燥或凍干后，即得。

本發(fā)明還首次將HPLC-ELSD方法應(yīng)用于酸棗仁湯中多糖的含量測定。采用Kromasil C18(250mm×4.6mm，5μm)色譜柱，以甲醇-水(5:95)為流動(dòng)相，ELSD檢測；將酸棗仁湯多糖提取物溶于水，水解后作為供試品溶液，由線性方程求出樣品液中葡萄糖的濃度，再按下式：多糖含量％＝f×(C×D)/W，[f為1.032，W為多糖提取物的重量(μg)，C為多糖中葡萄糖濃度(μg·mL-1)，D為稀釋體積(mL)] 計(jì)算樣品中多糖含量。

本發(fā)明以小鼠自主活動(dòng)次數(shù)、閾下劑量戊巴比妥鈉所致小鼠睡眠只數(shù)和閾上劑量戊巴比妥鈉所致小鼠睡眠時(shí)間為藥理指標(biāo)，確定了酸棗仁湯中具有鎮(zhèn)靜催眠作用多糖分子量范圍為小于50kDa。

具體實(shí)施方式

實(shí)施例1：精密稱取酸棗仁湯各組成藥味，即酸棗仁(54g)、茯苓(18g)、川芎(18g)、知母(18g)、甘草(9g)，置100ml圓底燒瓶中，置索氏提取器用10倍石油醚(60～65℃)脫脂4h，殘?jiān)〕觯稍铩⒀兴椤⑦^40目篩后，用25倍70％的乙醇回流提取3h除去皂苷、黃酮等雜質(zhì)，殘?jiān)俳?jīng)過干燥等處理，分別加10倍，8倍體積水浸提兩次(60～65℃)，每次1h。提取液靜置過夜后將上清液離心，上清液依次用50，10kDa的超濾膜進(jìn)行超濾處理。超濾溫度18～60℃，操作壓力0.02～0.2MPa，pH1～13，料液濃度為原始提取液濃度，所得截留液分別收集，濃縮至一定濃度，得到不同分子量范圍的酸棗仁湯多糖原液。抽濾，溶液經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器濃縮(60～65℃)后，加80％乙醇醇沉得到絮狀沉淀，4℃冷藏過夜，3000r/min離心10min得到沉淀，室溫下干燥后溶于水再經(jīng)過三次醇沉，得到M<10kD、10kD<M<50kD、M>50kD三段不同分子量酸棗仁湯多糖黃褐色多糖樣品，得率分別為4.8％，14.6％，35.6％。

實(shí)施例2：精密稱取酸棗仁湯各組成藥味，即酸棗仁(54g)、茯苓(18g)、川芎(18g)、知母(18g)、甘草(9g)，置100ml圓底燒瓶中，置索氏提取器用10倍石油醚(60～65℃)脫脂4h，殘?jiān)〕觯稍铩⒀兴椤⑦^40目篩后，用4倍50％的乙醇回流提取3h除去皂苷、黃酮等雜質(zhì)， 殘?jiān)俳?jīng)過干燥等處理，分別加10倍，5倍體積水浸提兩次(60～65℃)，每次0.5h。提取液靜置過夜后將上清液離心，上清液依次用50，10kDa的超濾膜進(jìn)行超濾處理。超濾溫度18～60℃，操作壓力0.02～0.2MPa，pH：1～13，料液濃度為原始提取液濃度，所得截留液分別收集，濃縮至一定濃度，得到不同分子量范圍的酸棗仁湯多糖原液。抽濾，溶液經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器濃縮后，加90％乙醇醇沉得到絮狀沉淀，4℃冷藏過夜，12000r/min離心5min得到沉淀，室溫下干燥后溶于水再經(jīng)過三次醇沉，得到M<10kD、10kD<M<50kD、M>50kD三段不同分子量酸棗仁湯多糖黃褐色多糖樣品，得率分別為4.0％，12.2％，30.1％。