[發明專利]基于卟啉化合物開關型熒光檢測谷胱甘肽的方法

有效

• 申請號: 201611016744.8
• 申請日: 2016-11-18
• 公開（公告）號: CN106645058B
• 公開（公告）日: 2019-02-22
• 發明（設計）人: 陳晶;馬琴;冉寶成;虎曉燕;高云靜;嚴小雨;盧小泉
• 申請（專利權）人: 西北師范大學
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64;C07D487/22;C09K11/06
• 代理公司: 蘭州智和專利代理事務所(普通合伙) 62201
• 代理人: 周立新

一種基于卟啉化合物開關型熒光檢測谷胱甘肽的方法，用丙酸、苯甲酸和吡咯制得四苯基卟啉；氯仿溶解四苯基卟啉，加入硫酸溶液，恒溫回流，得澄清溶液，冷卻后，滴入NaHCO₃溶液，冰水浴冷卻后過濾，蒸干濾過液，甲醇溶解固體產物，過濾并收集濾液；重復操作2～3次，合并濾液，重結晶，過濾，真空干燥得卟啉化合物；配制卟啉溶液；加入PBS緩沖溶液和Hg²⁺溶液，靜置，得熒光探針；加入谷胱甘肽儲備液，檢測熒光探針熒光強度變化，然后再加入谷胱甘肽儲備液，檢測熒光探針熒光強度變化，重復此過程直到熒光探針的熒光強度不再變化，通過熒光光譜儀檢測熒光發射光譜。該檢測方法檢測限比較低，可以達到肉眼檢測的效果。

技術領域

本發明屬于食品及生物體系檢測技術領域，涉及一種檢測食品及生物體系中谷胱甘肽的方法，具體涉及一種基于卟啉化合物開關型熒光檢測谷胱甘肽的方法。

背景技術

隨著社會和經濟的快速發展，人類的生活變得豐富多彩，各種各樣舌尖上的美味食品應運而生，給我們的生活帶來了無限的樂趣。但凡事都有兩面性，隨著人類科技的發展，各種各樣的問題出現了，如食品質量、能源危機和環境惡化以及人類最關心的健康問題等一系列問題已變為全球共同關注的問題。

谷胱甘肽是由谷氨酸、半胱氨酸和甘氨酸組成的，是大多數哺乳動物組織中主要的非蛋白質的低分子量的巰基化合物，在信號轉導、抗氧化和細胞增殖等諸多生命過程中扮演著重要的角色。作為機體內重要的生物活性巰基物質，谷胱甘肽（GSH）對于維持生物體內合適的氧化還原環境起著至關重要的作用。臨床上，GSH 可以迅速提高機體免疫力；在食品加工領域，GSH具有增強食品營養價值和強化食品風味等功能。據醫學相關部門報到，GSH的含量與人類疾病息息相關，例如癌癥、肝臟損傷、艾滋病、衰老和糖尿病等。因此找到一種方便、高效的GSH檢測方法對于我們的生活來說意義重大。因此，尋求高效、環保、低成本的分析檢測GSH的方法已被成為研究者所追求的目標。近年來研究者相繼報道了各種各樣的定量檢測谷胱甘肽的方法，如熒光光譜測定法、高效液相色譜法、電化學測試方法和紫外分光光度法等。與其它方法相比，具有操作簡單、成本低廉、無破壞性和靈敏度較高等特點的熒光分析法受到青睞。

卟啉是一種天然大分子化合物，具有16個原子18電子的共軛平面結構，因此它具有優越的光、電等理化特性。其中位和β位可以被不同的取代基取代而形成不同的卟啉化合物，因而它不僅在光電材料、分子識別、自組裝、熒光分析、藥物合成、天然產物模擬、電化學催化以及醫學顯影劑等領域應用廣泛，而且存在于動植物體中、 在生物氧化過程中起著氧的傳遞、儲存、活化及電子傳輸作用。

目前，很多分析檢測谷胱甘肽的方法在材料制備、分析檢測成本、設備需求以及檢測靈敏度方面都有不同程度的缺點。

發明內容

本發明的目的是提供一種成本低廉的基于卟啉化合物開關型熒光檢測谷胱甘肽的方法，降低檢測難度。

為實現上述目的，本發明所采用的技術方案是：一種基于卟啉化合物開關型熒光檢測谷胱甘肽的方法，具體按以下步驟進行：

1）將250mL丙酸油浴加熱至微沸后，加入10mL苯甲醛，得原料液；

將7mL吡咯減壓蒸餾后，溶于30mL丙酸中，得滴加液；

2）將滴加液緩慢滴入原料液，邊滴加邊回流，滴加完畢后，繼續回流1h后停止加熱，冷卻至室溫，靜置；抽濾，用無水乙醇及二次水各洗滌2～3次，烘干，得紫色固體；拌樣，用柱層析法純化，洗脫劑為二氯甲烷和石油醚的混合物；旋蒸、烘干得四苯基卟啉；