[發(fā)明專利]一種昆蟲(chóng)病原線蟲(chóng)共生菌及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201611009721.4
• 申請(qǐng)日: 2016-11-17
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN106635885B
• 公開(kāi)（公告）日: 2019-09-20
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王玲;來(lái)永才;李煒;畢影東;劉明;劉淼;楊帥;丁俊男;高媛;郭新宇
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 黑龍江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院耕作栽培研究所
• 主分類號(hào): C12N1/20
• 分類號(hào): C12N1/20;A01N63/00;A01N63/02;A01P3/00;A01P5/00;C12R1/01
• 代理公司: 哈爾濱市松花江專利商標(biāo)事務(wù)所 23109
• 代理人: 侯靜

一種昆蟲(chóng)病原線蟲(chóng)共生菌及其應(yīng)用，它涉及一種昆蟲(chóng)病原線蟲(chóng)共生菌及其應(yīng)用。該菌為致病桿菌(Xenorhabdus budapestensis)HEB02，保藏在中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏地址是北京市朝陽(yáng)區(qū)北辰西路1號(hào)院3號(hào)，保藏日期為2016年4月11日，保藏號(hào)CGMCC No.12352。用于防治大豆立枯病。本發(fā)明致病桿菌(Xenorhabdus budapestensis)HEB02具有較強(qiáng)的抑制大豆立枯病原菌絲生長(zhǎng)的能力，且隨著體積濃度的增加而增大，抑菌效果越明顯。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種昆蟲(chóng)病原線蟲(chóng)共生菌的分離及應(yīng)用。

背景技術(shù)

大豆[Glycine max(L.)Merr.]起源于中國(guó)，具有悠久的栽培歷史，作為我國(guó)重要的糧食作物和油料作物，其在我國(guó)農(nóng)業(yè)生產(chǎn)以及社會(huì)經(jīng)濟(jì)生活中都占有極其重要的地位。近年來(lái)，我國(guó)大豆產(chǎn)業(yè)發(fā)展遇到諸多瓶頸，種植面積和產(chǎn)量均呈逐年減少趨勢(shì)，其原因除了受到國(guó)際市場(chǎng)沖擊外，土傳病害的猖獗也是造成品質(zhì)差、單產(chǎn)低、持續(xù)生產(chǎn)力不穩(wěn)定等問(wèn)題的一個(gè)關(guān)鍵因素。大豆立枯病，俗稱黑根病，是由立枯絲核菌引起的一種重要的大豆土傳病害。該病主要在幼苗和幼株主根及近地面莖基部侵染發(fā)病，引起紅褐色稍凹陷病斑，皮層開(kāi)裂呈潰瘍狀，植株表現(xiàn)為外形矮小、生育遲緩，發(fā)病嚴(yán)重時(shí)，2-3天即可死苗。據(jù)調(diào)查，大豆立枯病在我國(guó)各大豆產(chǎn)區(qū)均有分布，病害嚴(yán)重年份，死亡率可達(dá)30％以上，生產(chǎn)上防控極為困難。

昆蟲(chóng)病原線蟲(chóng)共生菌是存在于昆蟲(chóng)病原線蟲(chóng)腸道內(nèi)的一類革蘭氏陰性細(xì)菌，屬腸桿菌科(Enterobacteriaceae)，包括致病桿菌屬(XeNorhabdus)、光桿狀菌屬(Photorhabdus)和沙氏菌屬(Serratia)，其分別與斯氏線蟲(chóng)屬(Steinernema)、異小桿線蟲(chóng)屬(Heterorhabditis)及擬異小桿線蟲(chóng)屬(Heterorhabditidoides)的線蟲(chóng)共生。在自然界，此類細(xì)菌存在于3齡侵染期線蟲(chóng)的腸道內(nèi)，隨著線蟲(chóng)的侵染，而被攜帶到寄主體內(nèi)并釋放到血腔中，經(jīng)大量繁殖，產(chǎn)生毒素，在48之內(nèi)就能殺死寄主。研究表明，昆蟲(chóng)病原線蟲(chóng)共生菌在離體人工培養(yǎng)時(shí)，也能夠產(chǎn)生多種物質(zhì)。隨著對(duì)昆蟲(chóng)病原線蟲(chóng)共生菌研究的不斷深入，這些產(chǎn)物的功能亦不斷被發(fā)現(xiàn)，如對(duì)多種動(dòng)植物加人類病原菌有廣泛的抑菌活性等。目前，昆蟲(chóng)病原線蟲(chóng)共生菌已成為一類新型的具有開(kāi)發(fā)潛力和應(yīng)用前景的能夠殺蟲(chóng)防病的生物資源。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明提供了一種昆蟲(chóng)病原線蟲(chóng)共生菌及其應(yīng)用。

本發(fā)明的一種昆蟲(chóng)病原線蟲(chóng)共生菌，它為致病桿菌(XeNorhabdusbudapestensis)HEB02，保藏在中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏地址是北京市朝陽(yáng)區(qū)北辰西路1號(hào)院3號(hào)，保藏日期為2016年4月11日，保藏號(hào)CGMCC No.12352。

它用于防治大豆立枯病。

本發(fā)明昆蟲(chóng)病原線蟲(chóng)共生菌為革蘭氏陰性菌，在營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上為乳黃色菌落，圓形，微凸，邊緣不整齊，隨著時(shí)間延長(zhǎng)顏色加深；在NBTA培養(yǎng)基上，初生型可吸收溴麝香百里酚藍(lán)(BTB)，形成藍(lán)色菌落，次生型不能吸收呈紫色菌落。根據(jù)《常見(jiàn)細(xì)菌系統(tǒng)鑒定手冊(cè)》方法進(jìn)行生理生化指標(biāo)測(cè)定，結(jié)果表明：昆蟲(chóng)病原線蟲(chóng)共生菌不能還原硝酸鹽，過(guò)氧化氫酶、氧化酶陰性，淀粉水解、吲哚實(shí)驗(yàn)陰性，葡萄糖、纖維二糖、麥芽糖、甘油等產(chǎn)酸為陽(yáng)性，蔗糖、蜜二糖、D-核糖等為陰性。

本發(fā)明昆蟲(chóng)病原線蟲(chóng)共生菌可在NBTA培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，生長(zhǎng)溫度為28℃，最適pH為7.2～7.4，轉(zhuǎn)速180r/min。NBTA培養(yǎng)基由牛肉膏5g、蛋白胨10g、營(yíng)養(yǎng)瓊脂20g、氯化鈉5g、溴麝香百里酚藍(lán)(BTB)0.025g、氯化三苯基四氮唑(TCC)0.04g和蒸餾水1000mL組成。

本發(fā)明昆蟲(chóng)病原線蟲(chóng)共生菌通過(guò)16S rDNA序列比對(duì)分析，與致病桿菌屬有極高的同源性，同源性為99％以上。通過(guò)結(jié)合菌體形態(tài)特征、生長(zhǎng)條件、生理生化鑒定結(jié)果確定昆蟲(chóng)病原線蟲(chóng)共生菌屬于致病桿菌屬(XeNorhabdus)，為致病桿菌XeNorhabdusbudapestensis。