[發明專利]一種基于數據依賴性質譜掃描模式的譜圖庫建立方法及其應用

在審

• 申請號: 201611006766.6
• 申請日: 2016-11-16
• 公開（公告）號: CN108072728A
• 公開（公告）日: 2018-05-25
• 發明（設計）人: 張麗華;胡曄晨;趙群;楊開廣;張玉奎
• 申請（專利權）人: 中國科學院大連化學物理研究所
• 主分類號: G01N30/88
• 分類號: G01N30/88
• 代理公司: 沈陽科苑專利商標代理有限公司 21002
• 代理人: 馬馳

1.一種基于數據依賴性質譜掃描模式的譜圖庫建立方法，其特征在于：

1)在數據庫建立階段，人為依據質荷比不同將母離子在氣象分成M個連續級分，每個級分為一個窗口，每個窗口的質荷比范圍相等或不等，對每個級分單獨掃描得到一級譜圖；

2)在無動態排除的數據依賴性質譜掃描模式下，將每個級分中強度排在前N的母離子分別進行二級碎裂，此時相當于一共進行了M*N個二級質譜掃描,獲得掃描范圍內全部母離子的碎片信息。

2.依照權利要求1所述的基于數據依賴性質譜掃描模式的譜圖庫建立方法，其特征在于：一級掃描母離子的質譜采集的質荷比窗口為250-6500m/z范圍內的任意區間。

3.依照權利要求1所述的基于數據依賴性質譜掃描模式的譜圖庫建立方法，其特征在于：依據質荷比不同將母離子在氣象分成連續級分時，將母離子質譜采集的質荷比窗口分為連續窗口，每個窗口大小為質荷比3m/z-1500m/z。

4.依照權利要求1所述的基于數據依賴性質譜掃描模式的譜圖庫建立方法，其特征在于：步驟1)中M為2-100中的任意整數，N為20-100中的任意整數。

5.依照權利要求1所述的基于數據依賴性質譜掃描模式的譜圖庫建立方法，其特征在于：質譜掃描所采用的是飛行時間質譜儀,且該飛行時間質譜儀的掃描速度能夠達到一秒15張譜圖及一秒15張譜圖以上。

6.一種權利要求1-5所述任一譜圖庫建立方法于蛋白質及其翻譯后修飾的多重無標記相對定量中的應用。

7.依照權利要求6所述的應用,其特征在于:

所述蛋白質為組蛋白，基于SWATH的組蛋白及其翻譯后修飾多重無標記定量操作方法具體為：

a:將一部分純化的不同對比組的組蛋白混合，進入質譜進行權利要求1中步驟1)和2)所述的譜圖庫建立階段；

b:將另一部分未混合的純化的不同對比組的組蛋白分別進入質譜進行SWATH定量；

c:在基于SWATH的定量階段，通過超高速掃描獲得掃描范圍內全部母離子的碎片信息，將這些信息與1)中建立的譜圖庫中的數據進行比對，通過提取此階段中母離子的A個子離子的峰面積，取加和或平均后獲得母離子的定量數據。

8.依照權利要求7所述的應用，其特征在于：步驟c中A為2-30中的任意整數。

9.依照權利要求7所述的應用，其特征在于：

步驟c所述的SWATH定量階段采用如下兩種方法中的一種:

將整個質譜采集窗口劃分為相隔25Da的掃描區間，同時碎裂每一個掃描區間內的所有母離子，得到混合的碎片離子譜圖，將這些譜圖與譜圖庫進行比對，用碎片離子色譜峰面積進行相對定量；

或者，依據待測樣品在整個質譜采集窗口中的豐度分布情況將質譜采集窗口劃分為間隔可變的多個(20-35個)掃描區間，同時碎裂每一個掃描區間內的所有母離子，得到混合的碎片離子譜圖，將這些譜圖與譜圖庫進行比對，用碎片離子色譜峰面積進行相對定量。

10.依照權利要求7所述的應用，其特征在于：

所述組蛋白為H1、H2A、H2B、H3、H4以及H1、H2A、H2B、H3、H4變體中的一種或多種；

組蛋白翻譯后修飾包括發生在賴氨酸、精氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、酪氨酸、組氨酸、谷氨酸一種或多種氨基酸上的單甲基化、二甲基化、三甲基化、甲酰化、乙酰化、丙酰化、丁酰化、巴豆酰化、丙二酰化、琥珀酰化、磷酸化、聚磷酸化、泛素化、瓜氨酸化、羥基化、ADP核糖基化、N-乙酰葡糖胺糖基化、2-羥基異丁酰化修飾一種或多種翻譯后修飾；

多重無標記相對定量包括2-20重樣品之間的無標記相對定量；

組蛋白及其翻譯后修飾的變化包括組蛋白及其變體含量的變化、翻譯后修飾含量與種類的變化以及發現新的組蛋白變體、翻譯后修飾和翻譯后修飾位點；

重要的生物學過程包括疾病發展的不同時期、疾病在不同的器官和組織中的分布、疾病在相同器官或組織中不同部位的分布、生物體受外界刺激所產生應激反應。