[發明專利]一種抗番茄斑萎病毒煙草植株的篩選方法

有效

• 申請號: 201611005486.3
• 申請日: 2016-11-16
• 公開（公告）號: CN106613136B
• 公開（公告）日: 2019-11-12
• 發明（設計）人: 黃昌軍;劉勇;于海芹;方敦煌;肖炳光;陳學軍;童治軍
• 申請（專利權）人: 云南省煙草農業科學研究院
• 主分類號: A01G22/45
• 分類號: A01G22/45;A01G31/00;A01G7/00
• 代理公司: 昆明正原專利商標代理有限公司 53100
• 代理人: 陳左;于洪

本發明涉及一種抗番茄斑萎病毒煙草植株的篩選方法，屬于植物保護技術領域。該方法包括本氏煙育苗、抗性鑒定煙苗準備、接種緩沖液的配制、本氏煙煙苗接種和抗病性鑒定五大步驟。本發明的原理是在進行煙草抗病性鑒定前，將田間采集的番茄斑萎病毒毒源在本氏煙上活化，采集本氏煙上的發病組織作為毒源進行抗病性鑒定。本發明可顯著提高番茄斑萎病毒接種效率，實現大規模數量的煙草品種抗病性鑒定，有效提高抗病性鑒定效率，特別適合從數量龐大的種質資源中篩選抗病靶標品種；并且減少了不同操作人員間的人為誤差，煙苗抗病性鑒定結果能夠準確反映煙苗在田間的抗病能力。

技術領域

本發明屬于植物保護技術領域，具體涉及一種抗番茄斑萎病毒煙草植株的篩選方法。

背景技術

番茄斑萎病毒（Tomato Spotted Wilt Virus, TSWV）已對煙葉生產構成了巨大的威脅。在局部地區可造成60％以上的嚴重損失，并有擴大和加重的趨勢。現有的主栽烤煙品種均能被番茄斑萎病毒侵染，成為番茄斑萎病毒流行、爆發的潛在威脅。由于其傳播介體——薊馬具有發育周期短、個體小易隱蔽、對殺蟲劑極易產生抗藥性等的特點，所以現有的防治措施難以取得理想的控制效果，因而，選育抗TSWV的烤煙品種是最經濟、最有效的手段。

由于傳毒薊馬個體小，飼養薊馬、分離無毒和帶毒薊馬需要較高的專業技術等限制，人工摩擦接種番茄斑萎病毒是抗病品種鑒定最常用的接種方法。然而具體操作下來，發現從田間采集的番茄斑萎病毒病葉直接接種煙草效率僅為60-70%，難以滿足煙草抗性鑒定的需要。推測原因為番茄斑萎病毒在作物上會產生壞死表型，壞死區域的細胞中病毒濃度較低，因此降低了病毒接種的起始濃度，造成了接種效率不能滿足抗性鑒定的需求。為加快抗病品種的鑒定和選育，急需發明一種改進的高效的人工接種方式。

發明內容

本發明的目的是為了解決現有技術的不足，提供一種抗番茄斑萎病毒煙草植株的篩選方法，利用本發明所述的方法，能顯著提高病毒接種的起始濃度，進而提高番茄斑萎病毒的接種效率，對于單株植物，能夠準確反映其對番茄斑萎病毒抗病性，同時，可鑒定各品種煙苗對番茄斑萎病毒的抗感性。

為實現上述目的，本發明采用的技術方案如下：

一種抗番茄斑萎病毒煙草植株的篩選方法，包括如下步驟：

步驟（1），本氏煙育苗：將本氏煙種子播于帶煙草漂浮育苗基質的漂浮育苗盤中育苗30-40天，剔除弱苗，挑選出長勢整齊一致的幼苗，并保證漂浮盤中每孔有一株生長健壯的本氏煙幼苗；

步驟（2），抗病性待檢煙苗育苗：在本氏煙播種15天后，將擬進行抗病性鑒定的煙草種子播于帶煙草漂浮育苗基質的漂浮育苗盤中育苗30-40天，剔除弱苗，挑選出長勢整齊一致的幼苗，并保證漂浮盤中每孔有一株生長健壯的抗病性待檢煙苗；

步驟（3），接種緩沖液的配制：配制0.1M pH7.0的磷酸緩沖液，121℃滅菌20分鐘；在接種前半個小時內，每100 mL磷酸緩沖液加入0.2 g亞硫酸鈉，10 uL beta-巰基乙醇，配成TSWV接種緩沖液，放置冰上，備用；

步驟（4），本氏煙煙苗接種：將田間獲得經過TSWV試紙條檢測的TSWV毒源接種于步驟（1）獲得的本氏煙幼苗，具體步驟如下：

取TSWV毒源1-2g，放于研缽中，加入5-10mL步驟（3）獲得的TSWV接種緩沖液和2-3g200-400目金剛砂，充分研磨至混合均勻，得到TSWV毒源汁液；

接種前洗凈雙手或者戴一次性乳膠手套操作；

接種時，首先將粒徑為200-400目金剛砂按照每片葉0.1-0.2g的用量均勻的撒至本氏煙幼苗的葉表面，之后取TSWV毒源汁液，用一只手托住待接種本氏煙幼苗葉片，另一只手從待接種本氏煙幼苗葉片的葉基到葉尖的方向輕輕地、均勻地涂擦TSWV毒源汁液；TSWV毒源汁液的用量為每片葉50-100ul；