[發明專利]3;3’-二吲哚甲烷提高臍帶間質干細胞旁分泌和治療皮膚損傷的用途

有效

• 申請號: 201611005232.1
• 申請日: 2016-11-16
• 公開（公告）號: CN106591225B
• 公開（公告）日: 2019-12-03
• 發明（設計）人: 張斌;史惠;許文榮;錢暉;潘昭吉;尤本帥;楊倫宇
• 申請（專利權）人: 江蘇大學
• 主分類號: C12N5/0775
• 分類號: C12N5/0775;A61K35/28;A61P17/02
• 代理公司: 暫無信息
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本發明涉及3,3’?二吲哚甲烷（3,3′?diindolylmethane，DIM）提高臍帶間質干細胞旁分泌和治療皮膚損傷的用途，屬于中藥用途技術領域；具體涉及的是DIM能夠提高提高臍帶間質干細胞的旁分泌和治療皮膚燒傷修復的效果；本發明所述的DIM對可以使臍帶間質干細胞的干細胞特性得到顯著地的提升，提高其向其他類型細胞分化的能力，同時可以促進臍帶間質干細胞IL?6、IL?8、G?CSF等旁分泌因子的增加，最終提高臍帶間質干細胞在皮膚燙傷中的修復作用，這一發現拓展了DIM的應用范圍，提高了臍帶間質干細胞促進皮膚組織再生的能力，具有廣闊的臨床應用前景。

技術領域

本發明涉及3,3’-二吲哚甲烷（3,3′-diindolylmethane，DIM）提高臍帶間質干細胞旁分泌和治療皮膚損傷的用途，屬于中藥用途技術領域。

背景技術

皮膚損傷是日常生活常見的一種創傷。皮膚損傷也是常見的戰傷之一，占戰傷的10%-30%，在核戰爭中的可達到90%。燒燙傷具有高發病率和死亡率。目前大面積的皮膚損傷治療主要通過全身支持治療、創面的清理及結痂切除和外科植皮等方法，傳統的治療方法雖然有一定效果但其結痂深度難于把握、皮源緊張和易感染的問題有待解決。

近年來，以干細胞特別是間質干細胞（mesenchymal stem cell，MSC）為基礎的皮膚再生醫學研究得到廣泛關注，研究表明MSC主要旁分泌促生長的細胞因子進而促進皮膚創傷的修復，在燒燙傷的修復中具有廣闊的臨床應用前景。然而，MSC注射體內后治療效果受其存活率和旁分泌生長因子多少的影響，因此試圖提高MSC細胞的旁分泌能力和增殖擴增能力是進一步提高其治療效果的關鍵。目前提高細胞干性和促再生能力的主要是通過基因改造的方法，但是基因編輯的不確定性導致其改造后的干細胞具有安全性的問題。近年來，通過藥物刺激來達到改造干細胞的研究越來越引起人們的重視。

3,3’-二吲哚甲烷（DIM）提取自十字花科蔬菜的天然化合物，它是吲哚-3-甲醇（I3C）的體內二聚產物，屬于吲哚芥子油苷的一種。目前對DIM的研究主要集中在其腫瘤治療的作用，其抗腫瘤的機制包括：調控腫瘤細胞的凋亡、增殖、細胞周期及腫瘤細胞中關鍵的信號通路。在組織再生方面，DIM具有促進肝臟和急性肺損傷修復的作用，但是，申請人前期的研究表明，低濃度的DIM具有促進胃癌細胞生長的作用，因此直接應用DIM存在著安全性的副作用，由此尋找一種既能體現DIM的促組織再生作用又能防止其副作用的方法是十分必要的。本發明首次將DIM作用于臍帶間質干細胞，發現DIM預處理的臍帶間質干細胞具有更好的旁分泌和促進皮膚燙傷修復的作用。

發明內容

本發明的目的在于克服現有技術中存在的缺陷而提供一種能夠提高人臍帶間質干細胞特性和旁分泌作用的新方法和新藥物。經驗證，DIM具備能夠促進hucMSC向脂肪細胞和骨細胞分化的能力，能夠促進hucMSC細胞分泌IL-6、IL-8、Wnt11等促進皮膚組織再生的因子的作用。

本發明涉及的DIM預處理的臍帶間質干細胞具有更好促進皮膚燙傷修復的作用。實驗證明DIM刺激后的臍帶間質干細胞更好地促進大鼠皮膚燙傷的創面愈合、更好地促進其表皮的再生化、皮膚細胞增殖再生能力等作用，具有極佳的臨床應用價值。

本發明涉及的DIM對臍帶間質干細胞預處理的步驟具體操作如下：

（1）臍帶間質干細胞的原代培養：依據已經建立的臍帶來源間質干細胞的方法進行分離培養，并進行多向分化和流式指標的鑒定（Qiao Chun et al. Human mesenchymalstem cells isolated from the umbilical cord. Cell Biol Int. 2008 Jan;32(1):8-15.）

（2）應用二甲基亞砜（DMSO）對DIM進行稀釋（DIM為疏水性藥物，需要DMSO進行助溶），稀釋到500 mM濃度的母液，后將此濃度的DIM再應用DMEM細胞培養液（含有胎牛血清）進行稀釋到應用濃度；