[發明專利]一類標記和/或檢測細胞中脂滴的熒光探針及其制備和應用

在審

• 申請號: 201610998399.6
• 申請日: 2016-11-14
• 公開（公告）號: CN108069902A
• 公開（公告）日: 2018-05-25
• 發明（設計）人: 徐兆超;鄧霏
• 申請（專利權）人: 中國科學院大連化學物理研究所
• 主分類號: C07D221/14
• 分類號: C07D221/14;C09K11/06;G01N21/64
• 代理公司: 沈陽科苑專利商標代理有限公司 21002
• 代理人: 馬馳

本發明屬于生物分析檢測領域，本發明涉及一類標記和/或檢測細胞中脂滴的熒光探針及其制備和應用。該探針是以4?溴?1,8?萘二甲酸酐為起始原料合成獲得，它以1,8?萘酰亞胺為熒光團，C12烷基長鏈為特異性脂滴定位基團，萘環4位的含N基團為熒光增強及穩定基團。該類探針制備簡單，產率高。與現有尼羅紅類及氟硼熒類脂滴熒光探針相比光穩定性高，斯托克位移大，更適合熒光成像。在細胞標記熒光成像及生物醫學領域有極其重要的應用價值。

技術領域

本發明屬于生物分析檢測領域，具體涉及一類標記和/或檢測細胞中脂滴的熒光探針及其制備方法和應用。

背景技術

脂滴是一個復雜、動態變化的多功能細胞器，由磷脂單分子層及中性脂構成疏水核心，并且表面分布有多種蛋白。長期以來，脂滴一直被認為是一種用來貯存能量的惰性內含物，因此并未引起科研人員的重視，但最新的研究表明，脂滴與跨膜運輸、信號轉導以及特殊情況下能量供應息息相關。脂滴廣泛存在于幾乎各類細胞中，已有研究表明細胞內脂滴含量的變化與肥胖、糖尿病以及動脈硬化等代謝紊亂性疾病息息相關，因此了解脂滴的生物學意義顯得尤為重要。

熒光探針已成為細胞生物學研究中的重要工具，它使研究者能在復雜生物環境中直觀地看到生理生化反應過程。在脂滴研究中，利用特異性的脂滴定位熒光探針能直觀地對細胞內脂滴的分布及含量進行分析，實現對細胞中脂滴生理生化過程的監控及相關疾病(包括肥胖癥、糖尿病、動脈硬化等)的前期診斷。目前僅有少數幾種脂滴特異性熒光探針報道，其中應用最為廣泛的是尼羅紅及氟硼熒兩大類。用尼羅紅來標記脂滴，其特異性不高，能對細胞內大部分結構進行染色，因此背景較強，難以將脂滴與細胞內其他結構區分。而氟硼熒類探針由于斯托克位移小，同時熒光不穩定易發生熒光淬滅，因此不利于長時間熒光成像分析。綜上所述，開發出新型光穩定的特異性脂滴標記熒光探針在細胞成像及相關疾病前期診斷上有重要意義。

發明內容

本發明的目的是提供一類標記和/或檢測細胞中脂滴的熒光探針及其制備方法和應用。該探針在復雜環境下能夠實現對脂滴的特異性標記，具有斯托克斯位移大，光穩定性好的優點，在熒光成像上與傳統脂滴標記染料尼羅紅及氟硼熒相比有顯著優勢。同時在探針的合成上具有原料廉價易得、步驟簡單、適合放大合成的優點。

本發明采用的技術方案為：

一類標記和/或檢測細胞中脂滴的熒光探針，具有如下結構通式(I)：

R為含氮基團，選自N,N-二甲基，氮丙啶，氮雜丁環，四氫吡咯，哌啶。

在本發明中所述熒光探針是以1,8-萘酰亞胺為熒光母體，烷基長鏈為定位基團，烷基鏈長度為，萘環4位的含氮基團為熒光增強及穩定基團。

本發明還提供所述熒光探針的制備方法：

合成步驟如下：

1)N-十二烷基-4-溴-1,8-萘酰亞胺的合成：將4-溴-1,8-萘酐按0.02-0.1g/mL比例用乙醇溶解，再加入相對于4-溴-1,8-萘酐1.5-2倍摩爾質量的十二烷基胺，80-100℃下回流反應8-12小時，停止加熱，降至室溫，將析出的固體過濾，用乙醇洗滌得到N-十二烷基-4-溴-1,8-萘酰亞胺；