[發明專利]臍帶血樣品稀釋液、試劑盒及處理臍帶血獲得干細胞的方法

有效

• 申請號: 201610993092.7
• 申請日: 2016-11-11
• 公開（公告）號: CN106754714B
• 公開（公告）日: 2020-05-19
• 發明（設計）人: 唐明淇;趙涌
• 申請（專利權）人: 北正賽歐（北京）生物科技有限公司
• 主分類號: C12N5/0789
• 分類號: C12N5/0789
• 代理公司: 北京科石知識產權代理有限公司 11595
• 代理人: 高元吉

本發明提供一種體外分離臍帶血干細胞的稀釋液、試劑盒及分離干細胞的方法。通過細胞稀釋劑、細胞沉淀劑和分層劑的配合使用，能夠快速分離出臍帶血中的干細胞，且分離出來的干細胞活性高，雜質細胞少，在臨床應用上具有重要的意義。

技術領域

本發明屬于生物技術應用領域，具體地涉及一種體外分離臍帶血樣品的稀釋液、試劑盒及處理臍帶血獲得干細胞的方法。

背景技術

臍帶血是胎兒娩出、臍帶結扎并離斷后殘留在胎盤和臍帶中的血液。近十幾年的研究發現，臍帶血中含有可以重建人體造血和免疫系統的造血干細胞，可用于造血干細胞移植，治療80多種疾病。因此，臍帶血已成為造血干細胞的重要來源，特別是無血緣關系造血干細胞的來源。因此，臍帶血是一種非常重要的人類生物資源。

目前，從臍帶血、骨髓和外周血中分離提取干細胞的方法包括以下幾種：體外擴增培養法、血細胞分離機法、免疫磁珠法、流式細胞儀法等。然而，這些方法中均存在若干缺點。例如，體外擴增培養法污染率較高，干細胞向未知方向分化為未知干細胞，且擴增時間長。血細胞分離機法需要打動員劑增加治療負擔，分離后細胞液體積過大。免疫磁珠法操作步驟復雜，細胞活性低，細胞濃度低。流式細胞儀法成本高，標記物有致癌性，應用于臨床不安全，只能適用于科研。

針對現有技術的不足，已公開了如下技術：

CN101089176A公開了一種干細胞分離液及其用于干細胞分離的方法。然而該方法需要配制工作液，需要調節密度，而且只能搜集密度在1.083g/ml范圍內的細胞，搜集到的細胞較雜，而可用于治療所需要的目標細胞數量少，并且對于臍帶血來說，使用該方法去除紅細胞不凈，最終臨床應用的時候會導致患者產生排異反應。

CN1948467A的專利申請中公開了用于分離骨髓單個核細胞的試劑盒。雖然使用該試劑盒可以直接分離血液中的干細胞，但是數量不足以臨床治療使用，所以該方法進行了細胞培養，培養的細胞污染率高，體外模擬體內環境使細胞擴增，導致培養出的細胞有形態沒功能，不能用于臨床治療。

CN102604892A的專利申請中公開了一種人類骨髓、臍帶血或外周血干細胞處理試劑盒及干細胞分離方法。然而該技術獲得的干細胞的數量占細胞總數量的比例較低，且存活率不高。

總之，現有技術中仍然存在對于新的臍帶血干細胞分離技術的需求。

發明內容

本發明的目的是針對現有技術中存在的缺陷，提供了一種操作簡便、使用安全、細胞活性高、雜質細胞少的臍帶血分離技術。具體地，本發明的一方面，提供一種臍帶血樣品稀釋液，其由氯化鈉、細胞保護劑和水組成，其中：

所述氯化鈉的含量為0.1-5重量％；

所述細胞保護劑的含量為0.1-3重量％；

余量為水；

所述細胞保護劑由80-90重量％的氨基酸、8-18重量％的磷脂、0.5-2重量％的腺嘌呤和0.1-3重量％的肽類生長因子組成；

所述氨基酸選自丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、蛋氨酸、甘氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、半胱氨酸、酪氨酸、賴氨酸、精氨酸、組氨酸、天冬氨酸和谷氨酸中的至少一種。

在某一實施方案中，所述細胞保護劑由84重量％的氨基酸、14重量％的磷脂、1重量％的腺嘌呤和1重量％的肽類生長因子組成。

在某一實施方案中，所述細胞保護劑的含量為2重量％。

在某一實施方案中，所述氯化鈉的含量為0.9重量％。