[發(fā)明專利]靶向CD19-41BB-tEGFR的嵌合抗原受體及其用途

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201610987904.7
• 申請日: 2016-11-10
• 公開（公告）號: CN108070607B
• 公開（公告）日: 2020-12-08
• 發(fā)明（設計）人: 黃飛;金濤;王海鷹;何鳳;史子嘯
• 申請（專利權）人: 上海恒潤達生生物科技有限公司
• 主分類號: C12N15/62
• 分類號: C12N15/62;C12N15/867;C12N7/01;C12N5/10;C07K19/00;A61K35/17;A61P35/00;A61P35/02
• 代理公司: 上海專利商標事務所有限公司 31100
• 代理人: 韋東

本發(fā)明涉及靶向CD19的嵌合抗原受體及其用途。具體而言，本發(fā)明提供一種多核苷酸序列，選自：(1)含有依次連接的抗CD19單鏈抗體的編碼序列、人CD8α鉸鏈區(qū)的編碼序列、人CD8跨膜區(qū)的編碼序列、人41BB胞內區(qū)的編碼序列、人CD3ζ胞內區(qū)的編碼序列和任選的EGFR的含胞外結構域III和胞外結構域IV的片段的編碼序列的多核苷酸序列；和(2)(1)所述多核苷酸序列的互補序列。本發(fā)明還提供相關的融合蛋白、含所述編碼序列的載體，以及所述融合蛋白、編碼序列、載體的用途。

技術領域

本發(fā)明屬于嵌合抗原受體領域，具體涉及靶向CD19的嵌合抗原受體及其用途。

背景技術

嵌合抗原受體(Chimeric Antigen Receptor-T cell，CAR-T)T細胞是指經基因修飾后，能以MHC非限制性方式識別特定目的抗原，并且持續(xù)活化擴增的T細胞。2012年國際細胞治療協(xié)會年會中指出生物免疫細胞治療已經成為手術、放療、化療外的第四種治療腫瘤的手段，并將成為未來腫瘤治療必選手段。CAR-T細胞回輸治療是當前腫瘤治療中最明確有效的免疫治療形式。大量研究表明，CAR-T細胞可以有效的識別腫瘤抗原，引起特異性的抗腫瘤免疫應答，顯著改善患者的生存狀況。

嵌合抗原受體(CAR)是CAR-T的核心部件，賦予T細胞HLA非依賴的方式識別腫瘤抗原的能力，這使得經過CAR改造的T細胞相較于天然T細胞表面受體TCR能夠識別更廣泛的目標。CAR的基礎設計中包括一個腫瘤相關抗原(tumor-associated antigen，TAA)結合區(qū)(通常來源于單克隆抗體抗原結合區(qū)域的scFV段)，一個胞外鉸鏈區(qū)，一個跨膜區(qū)和一個胞內信號區(qū)。目標抗原的選擇對于CAR的特異性、有效性以及基因改造T細胞自身的安全性來講都是關鍵的決定因素。

隨著嵌合抗原受體T細胞(Chimeric Antigen Receptor-T cell，CAR-T)技術的不斷發(fā)展，目前CAR-T主要可劃分為四代。

第一代CAR-T細胞由胞外結合區(qū)-單鏈抗體(single-chain fragment variable,scFV)、跨膜區(qū)(transmembrane region,TM)和胞內信號區(qū)——免疫受體酪氨酸活化基序(immunoreceptortyrosine-based activation motif,ITAM)組成，其中嵌合抗原受體各部分按如下形式連接：scFv-TM-CD3ζ。第一代CAR雖然能夠看到一些特異性的細胞毒性，但2006年對其進行臨床試驗總結的時候卻發(fā)現(xiàn)療效差強人意。究其原因是因為第一代CAR-T細胞在病人體內很快就會耗竭，其持久性(persistence)很差，以至于CAR-T細胞還沒有來得及接觸到大量的腫瘤細胞時就已經凋亡了該種CAR-T細胞可以激發(fā)抗腫瘤的細胞毒性效應，但是細胞因子分泌比較少，但其在體內的存活期較短不能激發(fā)持久的抗腫瘤效應。[Cancer Res.2007,67(22):11029-11036.]

第二代CAR-T細胞優(yōu)化CAR設計中T細胞活化信號區(qū)仍然是研究的熱點。T細胞的完全活化有賴于雙信號和細胞因子的作用。其中第一信號為特異性信號，由TCR識別抗原遞呈細胞表面的抗原肽-MHC復合物所啟動；第二信號為協(xié)同刺激信號。早在1998年就出現(xiàn)了第二代CAR(J Immunol.1998；161(6):2791-7.)。第2代CAR在胞內信號肽區(qū)添加了一個協(xié)同刺激分子，即把協(xié)同刺激信號組裝到CAR里面，能夠更好的為CAR-T細胞提供活化信號，這樣CAR識別腫瘤細胞后能夠同時活化協(xié)同刺激分子和胞內信號，實現(xiàn)雙重活化，能明顯提高T細胞增殖分泌能力和抗腫瘤效應。第一個被詳細研究的T細胞共刺激信號受體是CD28，它能夠與靶細胞表面的B7家族成員結合。CD28的共刺激能夠促進T細胞的增殖，IL-2的合成和表達以及增強T細胞抵抗凋亡的能力。隨后又出現(xiàn)了CD134(OX40)和CD137(4-1BB)等共刺激分子，以提高T細胞的細胞毒性、增殖活性，維持T細胞應答，延長T細胞存活時間等。這樣的第二代CAR在隨后的臨床試驗中產生了意想不到的效果，從2010年起基于第二代CAR的臨床報道屢次引發(fā)震動，特別是對于復發(fā)性、難治性的ALL病人，其完全緩解率高達90％以上。