[發明專利]水稻基因組重組核酸片段RecCR012069及其檢測方法

有效

• 申請號: 201610985302.8
• 申請日: 2016-10-25
• 公開（公告）號: CN107988218B
• 公開（公告）日: 2020-06-23
• 發明（設計）人: 周發松;喻輝輝;陸青;劉剛;陳偉康;韋懿;石義濤;宋丁丁;張龍雨;雷昉;姚玥;李旭;潘麗;李菁;陳光
• 申請（專利權）人: 中國種子集團有限公司
• 主分類號: C12N15/11
• 分類號: C12N15/11;C12Q1/6895;A01H1/02;A01H1/04
• 代理公司: 北京英賽嘉華知識產權代理有限責任公司 11204
• 代理人: 王達佐;洪欣

1.水稻基因組重組核酸片段，其由以下的第一重組核酸片段和第二重組核酸片段組成：

-第一重組核酸片段，其為SEQ ID NO:1所示的序列或其互補序列；和

-第二重組核酸片段，其為SEQ ID NO:2所示的序列或其互補序列。

2.檢測權利要求1所述重組核酸片段的引物組，其中所述引物組選自：

(I)擴增第一重組核酸片段的引物對

5’-GGGGTGGTTCGACTACCTCGACAA-3’，

5’-CCCAAAGAGGAAAGGCAAACCAAA-3’；

5’-TACATGCTATGTCGCGGACGAAGG-3’，

5’-GACAGATGAGTAAATCGGTAGA-3’；以及

(II)測序第一重組核酸片段的引物

5’-GGTTCGACTACCTCGACAA-3’；

5’-CTAGGCATTTGCGTTTCCC-3’；

5’-CGAAACGAGCTAAAGCAA-3’；和

(III)擴增第二重組核酸片段的引物對

5’-TCGGCTGTGAATCTATGATGTCTT-3’，

5’-AACCACCCTGCTCCTACGTCTTCT-3’；以及

(IV)測序第二重組核酸片段的引物

5’-CGAAGCCTATTCCGTTAAA-3’；

5’-GGTATGAATCCTGTCTCCC-3’。

3.選育含有權利要求1所述的重組核酸片段的水稻植株的方法，其中所述重組核酸片段具有稻瘟病抗性功能，并且所述方法包括以下步驟：

1)將輪回親本水稻‘空育131’與供體水稻‘谷梅4號’進行雜交，將所得到的雜交種與輪回親本進行回交，獲得回交一代，利用正向選擇標記Pi2-4和負向選擇標記Pi2S27、RM7311對其進行抗稻瘟病基因組片段的單側同源重組片段篩選，并利用水稻全基因組育種芯片對其進行背景選擇；

2)選擇背景回復較好的重組單株與輪回親本再次進行回交，獲得回交二代，利用正向選擇標記Pi2-4對其進行檢測，選擇含有抗稻瘟病基因組片段的重組單株，然后利用水稻全基因組育種芯片對其進行背景選擇；

3)選擇背景回復好的重組單株與輪回親本又一次進行回交，獲得回交三代，利用正向選擇標記Pi2-4和負向選擇標記Pi2S27、RM7311對其進行抗稻瘟病基因組片段的另一側同源重組片段篩選，并利用水稻全基因組育種芯片對其進行背景選擇；以及

4)選擇導入片段小，且背景回復好的重組單株，將選中的重組單株自交一次，獲得自交種，利用正向選擇標記Pi2-4對其進行檢測，并利用水稻全基因組育種芯片對其進行背景選擇，最終獲得含純合基因組重組核酸片段且背景回復的水稻植株，

其中利用分子標記對重組植株進行前景選擇時采用的擴增引物如下：

擴增分子標記Pi2-4的引物對為：

正向引物：5’-CGGTAAGAGTAACACCAAGC-3’，

反向引物：5’-GACGTGCGAGTTGTGACAGCT-3’；擴增分子標記Pi2S27的引物對為：

正向引物：5’-CGATACAAAGGATGGACGTG-3’，

反向引物：5’-TACCTCTCTGTGCGATTTGC-3’；以及

擴增分子標記RM7311的引物對為：

正向引物：5’-CTAGTTTATGCCCTCGTTTCTTGC-3’，

反向引物：5’-ATGGAAGTGGTCGTTGAACTCG-3’。

4.檢測權利要求1所述的重組核酸片段的方法，其包括采用權利要求2所述的引物組，以待測基因組為模板進行PCR反應，并分析PCR產物的步驟。

5.檢測權利要求1所述的重組核酸片段的試劑盒，其包括權利要求2所述的引物組。

6.篩選含有權利要求1所述的重組核酸片段的水稻植株或種子的方法，其包括檢測待測水稻植株或種子的基因組中是否含有權利要求1所述的重組核酸片段的步驟。

7.如權利要求6所述的方法，采用權利要求2所述的引物組，或者采用權利要求4所述的方法，或者采用權利要求5所述的試劑盒來進行檢測。