[發(fā)明專利]一種能抑制和殺滅多種耐藥性細(xì)菌的新多肽

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201610983977.9
• 申請(qǐng)日: 2016-11-09
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN106632611B
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-03-27
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 覃佐東;羅小芳;李治章;何福林;彭千芮
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 湖南科技學(xué)院
• 主分類號(hào): C07K7/08
• 分類號(hào): C07K7/08;C07K1/06;C07K1/04;A61K38/10;A23K20/147;A61P31/04
• 代理公司: 桂林市華杰專利商標(biāo)事務(wù)所有限責(zé)任公司 45112
• 代理人: 羅玉榮

本發(fā)明公開(kāi)的一種能抑制和殺滅多種耐藥性細(xì)菌的多肽，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1?2所示。該抗菌肽用于抑制和殺滅以耐甲氧西林金黃色葡萄球菌、李斯特菌為代表的革蘭氏陽(yáng)性菌或以大腸桿菌為代表的革蘭氏陰性菌有顯著的效果。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及抗菌肽，特別是能抑制和殺滅細(xì)菌的多肽，具體是一種能抑制和殺滅多種耐藥性細(xì)菌的新多肽。

背景技術(shù)

抗生素濫用導(dǎo)致病原微生物產(chǎn)生高水平抗藥性和多藥物抗性(multidrugresistance，MDR)已經(jīng)成為世界性的難題。近幾年來(lái)，具有MDR的“超級(jí)病菌”在世界各地相繼爆發(fā)，嚴(yán)重威脅著人類的生命和健康安全。大量研究表明，致病菌通過(guò)基因的水平轉(zhuǎn)移等機(jī)制可獲得MDR，并抵抗多種臨床一線使用的抗生素。為了應(yīng)對(duì)來(lái)自“超級(jí)耐藥細(xì)菌”日益嚴(yán)峻的挑戰(zhàn)，人們除了對(duì)現(xiàn)有抗生素進(jìn)行修飾改良和發(fā)掘新型抗生素外，更寄希望于挖掘抗生素的替代物以緩解“超級(jí)耐藥細(xì)菌”所造成的世界衛(wèi)生安全危機(jī)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種能抑制和殺滅多種耐藥性細(xì)菌的新多肽，以解決上述背景技術(shù)中存在的問(wèn)題。

本發(fā)明所述的能抑制和殺滅多種耐藥性細(xì)菌的新多肽，具體的是一種能抑制或殺滅以耐甲氧西林金黃色葡萄球菌、李斯特菌為代表的革蘭氏陽(yáng)性菌，或以大腸桿菌為代表的革蘭氏陰性菌的新多肽。

本發(fā)明的能抑制和殺滅多種耐藥性細(xì)菌的新多肽，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1-2所示。

上述SEQ ID NO.1-2所對(duì)應(yīng)的被命名的編碼為XC-16，其序列如下：

XC-16A：Lys-Leu-Leu-Asp-Ile-Val-Lys-Lys-Arg-Val-Arg-Ala-Phe-Trp-Ser-Leu（SEQ ID NO.1）；

XC-16B：Lys-Leu-Leu-Asp-Ile-Val-Lys-Lys-Val-Val-Arg-Ala-Phe-Arg-Ser-Leu（SEQ ID NO.2）；

上述抗菌肽的制備方法，采用現(xiàn)有的固相化學(xué)合成法中的BOC法制備。

具體包括：

一、樹(shù)脂合成

1) Peptide acid Merrifield Resin and PAM Resin

2) Peptidecarboxamide MBHA Resin

二、肽鏈合成

1) 氨基酸的偶聯(lián)；

2) N-端Boc基團(tuán)的切除；

在HF切割以前須將 N-端Boc保護(hù)基團(tuán)用TFA除去。手工切割N-端Boc基團(tuán)方法是用TFA/DCM比為1：1的溶液在室溫條件下洗滌反應(yīng)15 min。

三、切割

1）切割前的樹(shù)脂準(zhǔn)備：所有樹(shù)脂在切割前必須完全的洗凈和干燥。

特殊情況處理：

A）His的Dnp保護(hù)基團(tuán)的切割 ： 用最小體積的DMF溶脹樹(shù)脂； 用20 mol的苯硫酚處理1-2 h； 將樹(shù)脂轉(zhuǎn)移到黏結(jié)玻璃漏斗中，在用HF液體或TFMSA處理前以DMF，甲醇和冷乙醚頻繁沖洗。

B）含Trp的多肽樹(shù)脂的脫甲酰基： 以體積比為1：10哌啶/DMF液放入圓底燒瓶中，并在冰浴中冷卻； 加入多肽樹(shù)脂（1 g/10 mL），在0℃下攪拌反應(yīng)2 h； 用DMF（5倍體積）洗兩次，DCM兩次，MeOH兩次； 用HF切割前高真空干燥上述所得樹(shù)脂至少4 h。

2） HF 切割