[發(fā)明專利]一種制備表皮缺損治療藥物的新方法

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• 申請?zhí)枺?/td>: 201610982972.4
• 申請日: 2016-11-08
• 公開（公告）號: CN108066824A
• 公開（公告）日: 2018-05-25
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 裴雪濤;張博文;何麗娟;岳文;裴海云;曾泉
• 申請（專利權(quán)）人: 華南生物醫(yī)藥研究院
• 主分類號: A61L27/60
• 分類號: A61L27/60;A61L27/54;A61L27/38;A61L27/22;A61L27/24
• 代理公司: 北京清亦華知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11201
• 代理人: 李志東

1.試劑盒在制備藥物中的用途，其特征在于，所述藥物用于治療表皮缺損，所述試劑盒，包括：

第一試劑，所述第一試劑包括外泌體和細胞因子；以及

第二試劑，所述第二試劑包括生物支架和干細胞。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于，所述細胞因子包括下列至少之一：

堿性成纖維生長因子；以及

表皮生長因子。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的用途，其特征在于，所述試劑盒包括：

2～100μg/ml的外泌體；

10～50ng/ml的堿性成纖維生長因子；

10～50ng/ml的表皮生長因子；

生物支架；以及

間充質(zhì)干細胞，所述間充質(zhì)干細胞以1×105～1×106個細胞/cm2的密度負載于所述生物支架上，

優(yōu)選地，所述試劑盒包括：

2～50μg/ml的外泌體；

10～30ng/ml的堿性成纖維生長因子；

10～30ng/ml的表皮生長因子；

生物支架；以及

間充質(zhì)干細胞，所述間充質(zhì)干細胞以1.5×105～8×105個細胞/cm2的密度負載于所述生物支架上，

更優(yōu)選地，

所述試劑盒包括：

5μg/ml外泌體；

10ng/ml的堿性成纖維生長因子；

20ng/ml的表皮生長因子；

生物支架；以及

間充質(zhì)干細胞，所述間充質(zhì)干細胞以5×105個細胞/cm2的密度負載于所述生物支架上。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于，所述外泌體是通過下列步驟所得到的：

將間充質(zhì)干細胞接種于含有細胞生長培養(yǎng)基的細胞培養(yǎng)皿中，進行培養(yǎng)至所述間充質(zhì)干細胞處于生長對數(shù)期且細胞匯合度達到90％以上，將細胞生長培養(yǎng)基更換為外泌體收集培養(yǎng)基，添加量為6ml/皿，于37℃，5％二氧化碳培養(yǎng)條件下培養(yǎng)細胞48小時，收集培養(yǎng)液；

將所述培養(yǎng)液于4℃，300g離心10分鐘，收集第一上清液；

將所述第一上清液于4℃，2000g離心10分鐘，收集第二上清液；

將所述第二上清液于4℃，10000g離心30分鐘，收集第三上清液；

將所述第三上清液于4℃，110000g離心2小時，收集第一沉淀物；

用35ml PBS緩沖液重懸所述第一沉淀物，并于4℃，110000g離心2小時，收集第二沉淀物；以及

用100～200μl PBS緩沖液重懸所述第二沉淀物，以便得到所述外泌體。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于，所述外泌體及細胞因子是以混合溶液的形式提供的，優(yōu)選地，所述混合溶液的溶劑為生理鹽水。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于，所述干細胞為通用型干細胞，

所述通用型干細胞包括：脂肪源性干細胞、骨髓源性干細胞或臍帶源性干細胞，優(yōu)選臍帶源性干細胞，

所述生物支架包括：膠原蛋白、蠶絲蛋白或殼聚糖，優(yōu)選膠原蛋白。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于，所述第二試劑是通過包括下列步驟所得到的：

將所述干細胞接種于與所述生物支架相接觸的培養(yǎng)基中，進行培養(yǎng)，以便得到所述第二試劑。