[發(fā)明專利]一種多房棘球蚴多表位疫苗LTB-AE的設(shè)計、制備方法和應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201610970113.3
• 申請日: 2016-10-28
• 公開（公告）號: CN107041950B
• 公開（公告）日: 2020-06-02
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 格日力;湯鋒;李潤樂;樊海寧;劉川川;馮琳;劉文磊;楊寶良;楊全余
• 申請（專利權(quán)）人: 青海大學
• 主分類號: A61K39/00
• 分類號: A61K39/00;A61P33/10
• 代理公司: 北京科億知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11350
• 代理人: 陳正興

本發(fā)明涉及一種多房棘球蚴多表位疫苗LTB?AE的設(shè)計、制備方法和應(yīng)用，多房棘球蚴多表位疫苗LTB?AE的活性成分是一條多肽，主要由多房棘球蚴多表位肽AE以及黏膜免疫佐劑大腸桿菌不耐熱毒素B亞基(LTB)構(gòu)成。本發(fā)明主要通過基因合成技術(shù)合成多房棘球蚴多表位疫苗LTB?AE基因序列，通過雙酶切連接至表達載體中，然后將表達載體轉(zhuǎn)化進Arctic Express進行融合蛋白的表達。蛋白純化后，獲得多房棘球蚴多表位疫苗LTB?AE。該多房棘球蚴多表位疫苗能夠誘發(fā)機體產(chǎn)生針對多房棘球蚴T細胞及B細胞免疫應(yīng)答和高滴度特異性抗體體液免疫應(yīng)答，可用于預防和治療多房棘球蚴感染相關(guān)性疾病。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種多房棘球蚴疫苗的設(shè)計、制備方法和相關(guān)應(yīng)用。

背景技術(shù)

包蟲病(echinococcosis)是一種人畜共患型寄生蟲疾病，又稱棘球蚴病,包括由細粒棘球絳蟲引起的幼蟲病：單房/細粒棘球蚴病(cystic echinococcosis,CE)和多房棘球絳蟲引起的幼蟲病：多房棘球蚴病(alveolar echinocococosis,AE)。多房棘球蚴在中間宿主肝內(nèi)以出芽的方式生長或浸潤式增殖，產(chǎn)生新囊泡，長入肝組織，囊壁外角皮層很薄且常不完整，囊體與周圍組織間無明顯界限，囊液持續(xù)滲漏可與肝組織接觸，引起局部肝組織病變、增生、肝纖維化、萎縮、變性和壞死，晚期似肝癌樣轉(zhuǎn)移能轉(zhuǎn)移至肺、腦、乳腺等臟器，臨床有“蟲癌”之稱，預后極差。青海省是多房棘球蚴病的高發(fā)區(qū)，已被列為重點防治寄生蟲病之一。多房棘球蚴病具有發(fā)病范圍廣、惡性程度高、預后效果差的特點。在高原地域，大多數(shù)牧區(qū)患者出現(xiàn)癥狀時就醫(yī)往往已是晚期，不能手術(shù)切除，即使進行肝部分或半葉切除，術(shù)后復發(fā)率也很高。甲苯達唑、阿苯達唑等抗生素療法有一定的治療效果，但是由于需長期連續(xù)治療導致該療法具有耐藥性的出現(xiàn)及治療后復發(fā)率高等缺限。

表位疫苗具免疫特異性高、穩(wěn)定、無毒、分子結(jié)構(gòu)小而簡單等優(yōu)勢，并且表位疫苗可通過組合不同的Th1、Th2及B細胞表位可有效防止免疫逃避現(xiàn)象的發(fā)生，故已被應(yīng)用于抗細菌、病毒等感染與抗腫瘤中。表位疫苗與全菌疫苗、基因工程亞單位疫苗和DNA疫苗相比，具有以下優(yōu)點：(1)表位疫苗一般穩(wěn)定、無毒，具有更高的安全性。(2)抗原表位肽的分子結(jié)構(gòu)小而簡單，不會引起免疫抑制或者自身免疫性疾病。(3)表位疫苗可對抗原表位進行精確定位，具有更高的免疫針對性和特異性。(4)表位疫苗具有十分靈活的設(shè)計性，可組合不同Th、B細胞抗原表位，制成針對多種病原體的疫苗。(5)表位疫苗選用高保守性的抗原表位肽，可有效防止病原體快速基因突變所形成的免疫逃避機制。

研究發(fā)現(xiàn)Emy162具有很強的免疫作用，并穩(wěn)定表達于棘球蚴生命周期的各階段(原頭節(jié)、培養(yǎng)的棘球蚴、未成熟成蟲與成熟成蟲)，在棘球蚴的粘附及運動生理學中發(fā)揮重要的作用。Sugimoto C發(fā)現(xiàn)多房棘球蚴表面抗原TSP3具有良好的免疫原性；但是Oku Y等人在最新的研究中發(fā)現(xiàn)TSP3以及TSP3融合FBP在免疫老鼠的后期發(fā)生Th1型向Th2型的免疫類型的轉(zhuǎn)變，導致多房棘球蚴免疫逃逸的發(fā)生，抑制率僅為60％，因此以Emy162制備多房棘球蚴亞單位基因工程疫苗，存在不易表達、提取、純化等問題。故傳統(tǒng)藥物及疫苗在預防和治療包蟲病在臨床應(yīng)用中的效果確實不盡如人意。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的第一個目的在于提供一種針對多房棘球蚴的多表位疫苗。

本發(fā)明的第二個目的在于提供一種多房棘球蚴多表位疫苗的制備方法。

本發(fā)明的第三個目的在于提供多房棘球蚴多表位疫苗的用途。