[發明專利]一種有效觀察油棕雌蕊解剖結構的石蠟切片方法

有效

• 申請號: 201610949552.6
• 申請日: 2016-10-26
• 公開（公告）號: CN106501043B
• 公開（公告）日: 2018-11-09
• 發明（設計）人: 石鵬;李東霞;曹紅星;雷新濤;王永
• 申請（專利權）人: 中國熱帶農業科學院椰子研究所
• 主分類號: G01N1/28
• 分類號: G01N1/28;G01N1/06
• 代理公司: 海口翔翔專利事務有限公司 46001
• 代理人: 張耀婷

本發明公開了一種有效觀測油棕雌蕊解剖結構的石蠟切片方法，包括石蠟切片過程中樣品的取樣固定、保存整染、水洗返藍、脫水透明加碎蠟、透蠟包埋、修蠟塊、切片、展片、粘片、烘干、封片、烘片、觀片等步驟。本發明采用石蠟切片技術可有效獲得油棕雌蕊結構完整的石蠟切片，樣品經石蠟包埋后，樣品不受其褐變影響，能夠長久保存，切片時間隨意，獲得的切片平整、無皺褶、厚度均勻，顯微結果清晰，有利于開展油棕種質資源解剖結構的觀察和研究，在培育適合我國栽培的品種或篩選優良種質資源類型的工作中具有重要的意義。

技術領域

本發明涉及顯微觀察植物樣品技術領域，尤其涉及一種植物組織石蠟切片方法，具體涉及一種有效觀測油棕雌蕊解剖結構的石蠟切片方法。

背景技術

油棕(Elaeis guineensis Jacq.)屬于棕櫚科油棕屬的多年生木本油料作物，是世界上生產效率最高的產油植物，有“世界油王”之稱。油棕用途廣泛，主要產品為棕櫚油和棕櫚仁油，在食品、化工及生物能源等方面都有使用。

油棕在自然界的生殖方式為有性生殖方式，花是其重要的生殖器官。油棕的花為雌雄同株異序，雌蕊包括柱頭、花柱和子房，子房受精后發育成為果實，而子房中的胚珠發育成為種子。雌蕊解剖結構研究作為鑒定種質資源的重要依據之一，常作為評價植物結果情況和適應性強弱的重要手段，主要是通過利用植物組織切片在顯微鏡下觀察其結構的特征而得以實現。因此，探索有效獲得切片的方法在鑒定評價大量油棕種質時有重要的應用價值，有利于縮短油棕種質資源的鑒定周期。

作為植物組織切片的主要方式，冷凍切片雖然制作周期短，但由于油棕雌蕊本身組織結構易褐化、組織結構密實，冷凍切片切出的片子結構不易完整，切出片子無法長久保存，而且在冷凍切片過程每次都需取新鮮樣品進行固定和切片，很受取樣的限制，不夠靈活，不適宜于油棕雌蕊的觀察。

探索適合的石蠟切片技術應用于油棕組織解剖結構及細胞學研究中是一個重要問題，以前雖有其它植物組織石蠟切片的報道，但是，不同種類的植物組織有不同的特性，相關結果雖然有借鑒意義，卻不能完全應用于油棕組織切片研究。

目前，尚未見將石蠟切片技術應用于油棕雌蕊解剖結構研究的報道。

發明內容

本發明的目的是提供了一種有效觀測油棕雌蕊解剖結構的石蠟切片方法，采用石蠟切片技術可有效獲得結構清晰、完整的石蠟切片，有利于根據雌蕊的解剖結構開展油棕種質資源的鑒定和評價工作，對于培育或篩選適合我國栽培的油棕品種或種質資源具有重要意義。

為了實現上述目的，本發明的技術方案為：提供一種有效觀察油棕雌蕊解剖結構的石蠟切片方法，包括以下步驟：

(1)取樣固定：首先摘取所要觀察油棕整個的雌花序，帶回實驗室立刻進行選擇分割，選擇需要觀察的雌蕊，把接近花托部位的雌蕊完全剝下來，之后將萼片剝掉，立刻用刀將柱頭與子房分開，立刻將柱頭與子房一塊放入盛有卡諾固定液的高型稱量瓶(40×70mm)里面，每瓶的樣品數目為4～6個，當所需的樣品選取完后，用橡皮筋將牙簽扎有8～12個洞的塑料薄膜包裹在瓶口上面，放在真空干燥器中，抽真空1～1.5個小時；其中：樣品與卡諾固定液的質量體積比為1：16～1：20(g/ml)，卡諾固定液是按體積比3：1將乙醇與乙酸均勻混合構成；后面所述步驟中的材料與浸泡液的質量體積比范圍均為1：16～1：20(g/ml)；針對油棕雌蕊中胚珠非常接近花托部位的特點，本發明該步驟的取樣操作能夠有效觀察到油棕雌蕊中的胚珠結構；

(2)保存：樣品經抽真空固定后，經濃度95％乙醇、85％乙醇，每級浸泡20～25min，之后轉入濃度70％乙醇中浸泡2～3d保存備用，保存溫度為16～18℃。保存溫度為16～18℃有利于降低油棕組織的生命代謝過程，而又不會對其產生凍害作用，可以保存較長時間。