[發明專利]一種抗EGFR單克隆抗體制劑

有效

• 申請號: 201610949054.1
• 申請日: 2016-10-26
• 公開（公告）號: CN107987161B
• 公開（公告）日: 2021-04-16
• 發明（設計）人: 郭亞軍;寇庚;錢衛珠;郭懷祖;徐進
• 申請（專利權）人: 泰州邁博太科藥業有限公司
• 主分類號: C07K16/28
• 分類號: C07K16/28;C07K16/30;A61K39/395;A61K9/08;A61K47/26;A61K47/12;A61K47/02;A61P35/00
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本發明提供了一種穩定的抗EGFR單克隆抗體制劑。提供了一種液體制劑配方，使得經過大規模培養的抗EGFR單克隆抗體具有較強的穩定性。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，提供了一種穩定的抗EGFR單克隆抗體制劑。

背景技術

表皮生長因子受體（EGFR）也稱作c-erbB1/HER1，其家族成員都是生長因子受體酪氨酸激酶，它們在細胞表面與特異的生長因子或天然配體相互作用，如與EGF或TGFα相互作用，由此活化受體酪氨酸激酶。已發現的該家族第一個成員是表觀分子量為165KD的糖蛋白。

EGFR在調節腫瘤細胞的生長、修復和生存、新生血管生成、侵襲和轉移中具有重要的作用，同時在相當一部分的人類腫瘤中有表達。在很多惡性腫瘤中，EGFR的表達往往與較差的預后和較低的生存率相關。由此可知，如果有藥物能阻斷EGFR的活性，那將會抑制其磷酸化和信號傳導，從而起到多重途徑的抗腫瘤作用，同時也能增加化療和放療的抗腫瘤療效。在一些研究中，EGFR抑制劑與多種化療藥物和放療藥物聯合作用于一些腫瘤株時，表現出累加和協同作用。

EGFR抑制劑主要包括單克隆抗體（mAb）、酪氨酸激酶抑制劑、喹唑啉pyralo-/吡咯并-/吡啶并嘧啶、配體-毒素和免疫毒素聯結物，以及反義核苷酸和EGFR/配體主導的疫苗等。

一些體內和體外實驗顯示抗EGFR抗體成功的抑制了表達EGFR的腫瘤細胞株的生長。在實體瘤的治療中，一些抗EGFR單克隆抗體單獨應用或與傳統治療方法合并應用的治療結果令人鼓舞。

糖基化是蛋白質的一種重要的翻譯后修飾。蛋白質分子表面的糖鏈可對蛋白質分子的結構和功能產生深遠的影響，糖基化作為重要的翻譯后加工過程，對蛋白質的正確折疊、定位、免疫原性以及生物學活性有很大的影響。 mAb 的糖基化聚糖結構與抗體效應功能之間密切相關，通過影響 IgG 分子與 FcRs、Clq 以及 FcRn 的結合而分別調節 IgG 分子的抗體依賴細胞毒作用 (ADCC)、補體依賴的細胞毒作用 (CDC) 以及半衰期。糖基化作用還會影響 mAb 的安全性特征，特別是非人源聚糖，具有潛在的免疫原性。存在于 Fab 功能區的聚糖可以同時影響此類藥物的安全性和有效性特征。

糖基化修飾高度依賴于細胞表達系統和亞克隆選擇，細胞培養過程中的諸多因素，如培養基的成分，培養條件均會影響糖基化，進而影響治療性蛋白的生物學活性，療效，免疫原性以及藥代動力學。

在當前已上市的治療型單克隆抗體中，絕大多數是通過重組 DNA 技術實現的，絕大多數應用體外細胞培養的技術。由于哺乳動物細胞結構、功能和基因表達調控的復雜性，外源基因在哺乳動物細胞中的表達與在原核生物中的表達存在較大差異，因而外源基因在哺乳動物細胞中高效表達所需的元件也不同于在原核生物細胞中的表達所需的元件。外源基因在哺乳動物細胞中的表達包括基因的轉錄、mRNA 翻譯及翻譯后修飾等過程，翻譯后修飾主要包括蛋白質的糖基化、磷酸化、寡聚體的形成以及蛋白質分子內或分子間二硫鍵的形成，翻譯后修飾對于蛋白質的功能至關重要，要表達某些具有生物學功能的蛋白質如膜蛋白、抗體和具有特異性催化功能的酶有時必須在哺乳動物細胞中進行。CHO 細胞和小鼠骨髓瘤細胞 (NS0, SP2/0) 表達系統已經成為當前治療性抗體和 Fc-融合蛋白的金標準哺乳動物工程細胞。據統計，目前已批準上市的治療性單抗中, 48 % 表達于 CHO 細胞，而45 % 表達于鼠源細胞（21 % NS0 細胞，14 % SP2/0 細胞，10 % 雜交瘤細胞）。盡管多肽鏈的完整性在不同的表達系統和培養條件下看似不會發生變化，但糖基化類型的重大改變不容忽視。

抗體、與其他蛋白質治療劑一樣都是復雜的分子，并且由于在哺乳動物特別是人類中的治療有效劑量，通常不得在藥物制劑中使用大量的抗體。蛋白質治療劑的液體制劑應當保留蛋白質治療劑的完整生物活性并保護蛋白質治療劑的官能團在生產和貯存期限免于降解，蛋白質的降解途徑可以涉及化學不穩定性或物理不穩定性。