[發明專利]一種無巖藻糖基化的單克隆抗體在審

申請號：	201610947520.2	申請日：	2016-10-26
公開（公告）號：	CN107987160A	公開（公告）日：	2018-05-04
發明（設計）人：	湯波;張然;趙建敏;王建武;戴蘊平	申請（專利權）人：	無錫科捷諾生物科技有限責任公司;北京濟福霖生物技術有限公司
主分類號：	C07K16/28	分類號：	C07K16/28;C12P21/08;A61K39/395;A61P35/00;A61P35/02
代理公司：	北京路浩知識產權代理有限公司11002	代理人：	王文君
地址：	214145 江***	國省代碼：	江蘇;32
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摘要：
搜索關鍵詞：	一種無巖藻糖基化單克隆抗體
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【說明書】：

技術領域

本發明屬于基因工程領域，具體涉及一種無巖藻糖基化的單克隆抗體。

背景技術

蛋白質糖基化是一種最為常見的翻譯后修飾方式，是在糖基轉移酶的作用下將寡糖轉移至蛋白質，從而和蛋白質上特殊的氨基酸殘基形成糖苷鍵的過程。哺乳動物糖中蛋白質的糖基化類型主要分為三種：即由一個或多個單糖單元構成的N-連接糖鏈、O-連接糖鏈和GPI糖基磷脂酰肌醇錨。糖基化修飾使得不同的蛋白質具有不同的標記，由于糖蛋白質量數和電荷數的差異，單個糖基化位點即可產生明顯的異質性。糖蛋白的寡糖鏈結構多樣，具有豐富的識別信息，因此涉及到許多生物調節和識別過程，包括受體識別、炎癥及自身免疫疾病、信號傳導及新陳代謝等過程。此外，治療性蛋白的安全性、藥效性和血清半衰期等特性也會受到其糖基化模式的影響。

作為最重要的一類治療性蛋白，重組單克隆抗體藥物的有效性也高度依賴于其正確的糖基化模式。目前所有批準用于治療的單克隆抗體均為免疫球蛋白G(Immunoglobulin G,IgG)，大部分為IgG1。研究表明，人IgG重鏈Fc段的CH2區域內含有一個保守的N-連接糖基化位點Asn-297。因此每個IgG都可連接兩個具有N-連接的二分支或多分支雙觸角復合型寡糖，包含30余種不同的糖鏈類型，使抗體表現出高度的異質性。糖鏈模式分析表明，人IgG Asn-297位點的N-糖鏈結構通常為多至兩個半乳糖(Gal)殘基為末端的核心巖藻糖化二分支復合型核心結構。核心結構包括兩個β-N-乙酰氨基葡萄糖(GlcNac)和三個甘露糖(Man)單元。根據末端Gal殘基的數量和連接方式，抗體的糖型可分為G0、G1和G2多種類型，部分為具有核心巖藻糖基化的，如G0F，G1F等。抗體Fc段是細胞毒作用效應細胞配體結合位點，因此糖鏈結構的存在對于抗體介導的效應功能例如抗體依賴性細胞介導的細胞毒作用(ADCC)是至關重要的。

目前，美國和歐盟批準的抗體藥物43％由CHO細胞產生，50％來源于其它鼠源工程細胞(NSO或者SP2/0)，只有7％是由大腸桿菌表達的非糖基化抗體。雖然早期試驗證明CH0能夠產生與人類血清抗體糖型一致的抗體，但大多數工程細胞株產生抗體的糖基化與人血清抗體仍然存在著差別。例如鼠源性動物細胞產生的抗體糖型很少存在平分型半乳糖苷修飾，其巖藻糖修飾比例很高，且半乳糖苷(G)化修飾程度也比人血清抗體低，因而其主要的類型為G0F，而人血清抗體糖基化類型主要為G1F，如羅氏公司研制的治療B淋巴細胞瘤的抗人CD20嵌合單克隆抗體—利妥昔單抗(商品名為美羅華)，是利用哺乳動物細胞系表達生產的，其糖鏈結構主要為核心結構巖藻糖化的G0F糖型。近年來有很多研究表明，去除或降低巖藻糖基團可以明顯增強治療性抗體的ADCC活性，在體內和體外均能表現出更高的效能。

發明內容

本發明的目的在于克服現有單克隆抗體所存在的上述缺陷，提供一種具有高體外生物活性的無巖藻糖基化的單克隆抗體。

為達到以上目的，本發明提供了一種無巖藻糖基化的單克隆抗體，所述單克隆抗體為人IgG抗體，所述單克隆抗體的糖型核心結構以無巖藻糖化糖型為主。

優選地，所述單克隆抗體糖型核心結構的無巖藻糖化糖型比例占80％-100％以上。

優選地，所述單克隆抗體糖型核心結構的G2糖型占無巖藻糖化糖型30％-100％。

優選地，所述G2糖型單克隆抗體是其抗體的糖型核心結構上不含巖藻糖基團，且糖鏈末端具有2個半乳糖基團。

優選地，所述G2糖型單克隆抗體的糖型核心結構如式(I)所示的糖鏈結構：

優選地，所述單克隆抗體為抗CD20抗體。

優選地，所述單克隆抗體的重鏈的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

優選地，所述單克隆抗體的輕鏈的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示。

本發明提供了上述單克隆抗體在制備藥物中的應用。

所述的藥物為治療表達CD20的癌癥的藥物。