[發(fā)明專利]一種PRP負載緩釋抗菌素-間充質(zhì)干細胞凝膠系統(tǒng)及其制備方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201610944046.8
• 申請日: 2016-11-02
• 公開（公告）號: CN106362213B
• 公開（公告）日: 2019-11-19
• 發(fā)明（設計）人: 費軍;余洪俊;韓玉卓
• 申請（專利權(quán)）人: 中國人民解放軍第三軍醫(yī)大學第三附屬醫(yī)院
• 主分類號: A61L27/38
• 分類號: A61L27/38;A61L27/56;A61L27/54;A61L27/52;A61L27/50
• 代理公司: 11429 北京中濟緯天專利代理有限公司
• 代理人: 杜群芳<國際申請>=<國際公布>=<進入

1.一種PRP負載緩釋抗菌素-間充質(zhì)干細胞凝膠系統(tǒng)，其特征在于：在PRP中加入凝血酶和鈣離子，形成50～200μm的不規(guī)則微觀三維立體網(wǎng)格結(jié)構(gòu)；在此網(wǎng)格結(jié)構(gòu)上負載細菌敏感的抗菌素；所述網(wǎng)格結(jié)構(gòu)上還負載干細胞；所述抗菌素為青霉素類或氯霉素類或四環(huán)素類或頭孢菌素類或β內(nèi)酰胺類或克林霉素和林可霉素類或大環(huán)內(nèi)酯類或氨基糖甙類或喹諾酮類或糖肽類或碳氫霉烯類或惡唑烷酮類或抗結(jié)核藥物和抗菌肽類；

所述PRP負載緩釋抗菌素-間充質(zhì)干細胞凝膠系統(tǒng)的制備方法，按如下步驟進行：

(1)PRP-間充質(zhì)干細胞的制備：首先將2～10ml枸櫞酸鈉抗凝劑與10～45ml血液混合，在嚴格無菌條件下制備PRP，將混有抗凝劑的血液放入離心機中，以500～3500r/min，離心8～12分鐘后，取出離心管，試管中分為三層，上層為貧血小板血漿即PPP，中間層為PRP，最底層為紅細胞，抽出底層紅細胞，剩余3～5ml紅細胞，實施二次離心，離心轉(zhuǎn)數(shù)為1000～3000r/min，離心10min后，抽出上清液1/2～3/4，即PPP，剩余約8～10mlPRP；

間充質(zhì)干細胞系骨髓，水平離心機20℃條件下500g(2000r/min)離心25～30分鐘，計數(shù)1×10⁵～1×10⁶/ml，取1～3ml與PRP混合均勻，形成PRP-間充質(zhì)干細胞；

(2)再加入抗菌素，配置PRP負載緩釋抗菌素-間充質(zhì)干細胞凝膠系統(tǒng)；

其中步驟(2)配置PRP負載緩釋抗菌素-間充質(zhì)干細胞凝膠系統(tǒng)為將500～2000u普通凝血酶溶于0.5～2ml10％氯化鈣或葡萄糖酸鈣等鈣離子溶液中，另將敏感抗菌素0.3～5g均勻混入PRP中，以100～500r/min攪拌后，利用三腔管將凝血酶及鈣離子與PRP混合形成凝膠；

或者步驟(2)配置PRP負載緩釋抗菌素-間充質(zhì)干細胞凝膠系統(tǒng)為將抗菌素0.3～5g溶解在0.5～2ml0.9％氯化鈉中，利用三腔管將500～2000u普通凝血酶及0.5～2ml 10％氯化鈣或葡萄糖酸鈣等鈣離子溶液與PRP混合物噴灑在溶有抗菌素的鹽水中形成凝膠。

2.一種如權(quán)利1所述PRP負載緩釋抗菌素-間充質(zhì)干細胞凝膠系統(tǒng)的制備方法，按如下步驟進行：

(1)PRP-間充質(zhì)干細胞的制備：首先將2～10ml枸櫞酸鈉抗凝劑與10～45ml血液混合，在嚴格無菌條件下制備PRP，將混有抗凝劑的血液放入離心機中，以500～3500r/min，離心8～12分鐘后，取出離心管，試管中分為三層，上層為貧血小板血漿即PPP，中間層為PRP，最底層為紅細胞，抽出底層紅細胞，剩余3～5ml紅細胞，實施二次離心，離心轉(zhuǎn)數(shù)為1000～3000r/min，離心10min后，抽出上清液1/2～3/4，即PPP，剩余約8～10mlPRP；

間充質(zhì)干細胞系骨髓，水平離心機20℃條件下500g(2000r/min)離心25～30分鐘，計數(shù)1×10⁵～1×10⁶/ml，取1～3ml與PRP混合均勻，形成PRP-間充質(zhì)干細胞；

(2)再加入抗菌素，配置PRP負載緩釋抗菌素-間充質(zhì)干細胞凝膠系統(tǒng)；

其中步驟(2)配置PRP負載緩釋抗菌素-間充質(zhì)干細胞凝膠系統(tǒng)為將500～2000u普通凝血酶溶于0.5～2ml10％氯化鈣或葡萄糖酸鈣等鈣離子溶液中，另將敏感抗菌素0.3～5g均勻混入PRP中，以100～500r/min攪拌后，利用三腔管將凝血酶及鈣離子與PRP混合形成凝膠；

或者步驟(2)配置PRP負載緩釋抗菌素-間充質(zhì)干細胞凝膠系統(tǒng)為將抗菌素0.3～5g溶解在0.5～2ml0.9％氯化鈉中，利用三腔管將500～2000u普通凝血酶及0.5～2ml 10％氯化鈣或葡萄糖酸鈣等鈣離子溶液與PRP混合物噴灑在溶有抗菌素的鹽水中形成凝膠。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述PRP負載緩釋抗菌素-間充質(zhì)干細胞凝膠系統(tǒng)的制備方法，其特征在于：所述抗菌素為青霉素類或氯霉素類或四環(huán)素類或頭孢菌素類或β內(nèi)酰胺類或克林霉素和林可霉素類或大環(huán)內(nèi)酯類或氨基糖甙類或喹諾酮類或糖肽類或碳氫霉烯類或惡唑烷酮類或抗結(jié)核藥物和抗菌肽類。