[發(fā)明專利]脂肪間充質(zhì)干細胞凍存液以及脂肪間充質(zhì)干細胞凍存方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201610936192.6
• 申請日: 2016-11-01
• 公開（公告）號: CN106332869B
• 公開（公告）日: 2019-11-01
• 發(fā)明（設計）人: 汪錚;吳振化
• 申請（專利權）人: 浙江譯美生物科技有限公司
• 主分類號: A01N1/02
• 分類號: A01N1/02
• 代理公司: 北京維正專利代理有限公司 11508
• 代理人: 林樂飛

1.一種脂肪間充質(zhì)干細胞凍存液，其特征在于，包括如下重量份數(shù)的組分：

RPMI-1640培養(yǎng)基80-88份；

FBS為2-5份；

環(huán)丁砜1-2份；

乙醇1.5-2.5份；

乙二醇0.8-1.2份；

1,2-丙二醇0.8-1.2份；

吐溫80為0.3-0.7份，

甘油0.5-1.5份，

青霉素0.01-0.05份；

海藻糖0.5-1份；

聚乙烯吡咯烷酮0.5-0.8份；

瓊脂粉0.2-0.6份；

所述乙醇的質(zhì)量分數(shù)為5 wt%；所述乙二醇的質(zhì)量分數(shù)為10 wt%；所述1,2-丙二醇的質(zhì)量分數(shù)為10 wt%；所述青霉素的濃度為50U/mL；

還包括非滲透性冷凍保護劑，所述非滲透性冷凍保護劑的重量份數(shù)為1-1.5份，所述非滲透性冷凍保護劑選取羥乙基淀粉、葡聚糖中的至少一種；

還包括潤滑劑，所述潤滑劑的重量份數(shù)為0.3-0.5份，所述潤滑劑選取PEG-4000、PEG-6000、PEG-8000中的至少一種。

2.根據(jù)權利要求1所述的脂肪間充質(zhì)干細胞凍存液，其特征在于，包括如下重量份數(shù)的組分：

RPMI-1640培養(yǎng)基86份；

FBS為2.5份；

環(huán)丁砜1.6份；

乙醇2.3份；

乙二醇1.1份；

1,2-丙二醇1.1份；

吐溫80為0.5份，

甘油1.3份，

青霉素0.03份；

海藻糖0.6份；

聚乙烯吡咯烷酮0.7份；

瓊脂粉0.5份；

所述乙醇的質(zhì)量分數(shù)為5 wt%；所述乙二醇的質(zhì)量分數(shù)為10 wt%；所述1,2-丙二醇的質(zhì)量分數(shù)為10 wt%；所述青霉素的濃度為50U/mL。

3.權利要求1所述的一種采用脂肪間充質(zhì)干細胞凍存液凍存脂肪間充質(zhì)干細胞的方法，其特征在于，包括如下步驟：

S1，將環(huán)丁砜，5 wt%乙醇，10 wt%乙二醇，10 wt%1,2-丙二醇，吐溫80，甘油和瓊脂粉充分混合，形成輔助劑；

S2，向S1中獲得的輔助劑中加入RPMI-1640培養(yǎng)基，F(xiàn)BS，青霉素，海藻糖，聚乙烯吡咯烷酮，充分混合，形成凍存液混合物；

S3，取臨床上人體腹部皮下脂肪組織，經(jīng)PBS浸泡，清洗，離心，沉淀，獲得脂肪間充質(zhì)干細胞；

S4，將S3中獲得的脂肪間充質(zhì)干細胞進行接種和培養(yǎng)，取對數(shù)生長期的脂肪間充質(zhì)干細胞，清洗后置入S2中獲得的凍存液混合物中，在冰浴中，充分溫和混合1.5-2h后，形成脂肪間充質(zhì)干細胞混合物；

S5，將S4中獲得的脂肪間充質(zhì)干細胞混合物以1~2℃/min的速率進行降溫，至溫度降至-20~-25℃，獲得第一階段低溫脂肪間充質(zhì)干細胞混合物；

S6，將S5中獲得的第一階段低溫脂肪間充質(zhì)干細胞混合物放置于-80℃的冰箱內(nèi)過夜，獲得第二階段低溫脂肪間充質(zhì)干細胞混合物；

S7，將S6中獲得的第二階段低溫脂肪間充質(zhì)干細胞混合物置于液氮中進行冷凍保存。

4.根據(jù)權利要求3所述的一種采用脂肪間充質(zhì)干細胞凍存液凍存脂肪間充質(zhì)干細胞的方法，其特征在于，所述S1的輔助劑中加入非滲透性冷凍保護劑并充分混合。

5.根據(jù)權利要求4所述的一種采用脂肪間充質(zhì)干細胞凍存液凍存脂肪間充質(zhì)干細胞的方法，其特征在于，所述S1的輔助劑中加入潤滑劑并充分混合。