[發明專利]一種基于熒光能量共振轉移法的GFAP檢測方法有效
| 申請號： | 201610934223.4 | 申請日： | 2016-10-31 |
| 公開（公告）號： | CN106568750B | 公開（公告）日： | 2019-12-03 |
| 發明（設計）人： | 閆亞平;秦李娜;李科 | 申請（專利權）人： | 陜西脈元生物科技有限公司 |
| 主分類號： | G01N21/64 | 分類號： | G01N21/64;G01N33/68 |
| 代理公司： | 61200 西安通大專利代理有限責任公司 | 代理人： | 王霞<國際申請>=<國際公布>=<進入國 |
| 地址： | 710065 陜西省西安市高新區*** | 國省代碼： | 陜西;61 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 神經膠質纖維酸性蛋白 抗體 膠質纖維酸性蛋白 抗體復合物 熒光酶標儀 標準曲線 參考信息 固相抗體 抗體包被 抗體結合 臨床醫生 臨床診斷 熒光能量 腦卒中 人神經 微孔板 吸光度 熒光標 轉移法 預后 檢測 抗原 共振 微孔 診斷 評估 | ||
1.一種用于非診斷目的基于熒光能量共振轉移法的GFAP檢測方法，其特征在于，包括以下步驟：
1）采集待檢測全血樣品的血清；
2）用純化的神經膠質纖維酸性蛋白抗體包被微孔板，制成固相抗體；
3）向包被抗體的微孔中加入神經膠質纖維酸性蛋白，然后再與Alexa Fluor488以及Alexa Fluor594標記的神經膠質纖維酸性蛋白抗體結合，形成抗體-抗原-兩個熒光標記抗體復合物；
4）利用熒光能量共振轉移法，用酶標儀測定抗體-抗原-兩個熒光標記抗體復合物的吸光度，然后通過標準曲線計算出待檢測全血樣品中GFAP的濃度；
其中，步驟2）中，是將抗神經膠質纖維酸性蛋白抗體按1:200倍進行稀釋，然后每孔加入100μl，于4℃過夜包被，制得固相抗體；
步驟3）中，每孔加入1:200倍稀釋的Alexa Fluor488以及Alexa Fluor594標記的神經膠質纖維酸性蛋白抗體100μl，加上覆膜，于37℃溫育30min。
2.根據權利要求1所述的用于非診斷目的基于熒光能量共振轉移法的GFAP檢測方法，其特征在于，步驟1）中，采集血清具體操作為：將全血樣品于室溫下放置2h或4℃過夜后，于1000×g離心20min，取上清液即得到血清。
3.根據權利要求1所述的用于非診斷目的基于熒光能量共振轉移法的GFAP檢測方法，其特征在于，步驟4）中，是在激發波長為409nm，發射波長為617nm的條件下測定吸光度。
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