[發(fā)明專利]轉(zhuǎn)基因玉米品系VCO-01981-5檢測(cè)方法和試劑

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201610933272.6
• 申請(qǐng)日: 2016-10-25
• 公開（公告）號(hào): CN106636340B
• 公開（公告）日: 2020-09-15
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 凌杏園;潘廣;葉奕優(yōu);龍海;章桂明;程穎慧;向才玉;謝曉露
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 深圳海關(guān)動(dòng)植物檢驗(yàn)檢疫技術(shù)中心
• 主分類號(hào): C12Q1/6851
• 分類號(hào): C12Q1/6851;C12N15/11
• 代理公司: 深圳鼎合誠(chéng)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 44281
• 代理人: 彭家恩

1.一種轉(zhuǎn)基因玉米品系VCO-01981-5的檢測(cè)方法，其特征在于：包括在PCR反應(yīng)體系中加入礦物油，混勻后，將其轉(zhuǎn)移到微滴發(fā)生器上，自動(dòng)產(chǎn)生微滴，然后將微滴全部轉(zhuǎn)移到反應(yīng)管中進(jìn)行PCR反應(yīng)，PCR反應(yīng)結(jié)束后，讀取每個(gè)微滴的擴(kuò)增信號(hào)，并采用QuantaSoftV1.3.2軟件計(jì)算待測(cè)樣品的靶標(biāo)DNA分子數(shù)；

所述PCR反應(yīng)體系為雙重實(shí)時(shí)熒光PCR擴(kuò)增體系，包括PCR反應(yīng)液、品系VCO-01981-5特異引物組、品系VCO-01981-5特異探針、HMG基因特異引物組、HMG基因特異探針和待測(cè)樣品的DNA；

所述品系VCO-01981-5特異引物組的正向引物為Seq ID No.1所示序列，品系VCO-01981-5特異引物組的反向引物為Seq ID No.2所示序列，所述品系VCO-01981-5特異探針為Seq ID No.3所示序列，所述HMG基因特異引物組的正向引物為Seq ID No.4所示序列，HMG基因特異引物組的反向引物為Seq ID No.5所示序列，所述HMG基因特異探針為Seq IDNo.6所示序列；

Seq ID No.1：5’-aaggccttcagtctactcctcggg-3’

Seq ID No.2：5’-ctagcggccgctactcgagggattt-3’

Seq ID No.3：5’-cgtcaccaagaagatcagtactcaaacac-3’

Seq ID No.4：5’-TTGGACTAGAAATCTCGTGCTGA-3’

Seq ID No.5：5’-GCTACATAGGGAGCCTTGTCCT-3’

Seq ID No.6：5’-CAATCCACACAAACGCACGCGTA-3’

其中，Seq ID No.3所示序列的品系VCO-01981-5特異探針中，5’末端具有FAM熒光基團(tuán)，3’末端具有BHQ-1淬滅基團(tuán)；Seq ID No.6所示序列的HMG基因特異探針中，5’末端具有HEX熒光基團(tuán)，3’末端具有BHQ-1淬滅基團(tuán)；

所述檢測(cè)方法還包括，采用QuantaSoft V1.3.2軟件分別計(jì)算出轉(zhuǎn)基因玉米品系VCO-01981-5的分子數(shù)和HMG基因分子數(shù)后，根據(jù)轉(zhuǎn)基因玉米品系VCO-01981-5分子數(shù)和HMG基因分子數(shù)的比值，計(jì)算轉(zhuǎn)基因玉米品系VCO-01981-5的絕對(duì)含量。

2.一種轉(zhuǎn)基因玉米品系VCO-01981-5定量檢測(cè)的試劑，其特征在于：所述試劑包括第一引物探針組合和第二引物探針組合，所述第一引物探針組合用于品系VCO-01981-5特異性檢測(cè)，所述第二引物探針組合用于HMG基因特異性檢測(cè)；

所述第一引物探針組合中，正向引物為Seq ID No.1所示序列，反向引物為Seq IDNo.2所示序列，探針為Seq ID No.3所示序列，并且探針的5’末端具有FAM熒光基團(tuán)，3’末端具有BHQ-1淬滅基團(tuán)；

所述第二引物探針組合中，正向引物為Seq ID No.4所示序列，反向引物為Seq IDNo.5所示序列，探針為Seq ID No.6所示序列，并且探針的5’末端具有HEX熒光基團(tuán)，3’末端具有BHQ-1淬滅基團(tuán)。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的試劑在制備轉(zhuǎn)基因玉米檢測(cè)試劑盒或檢測(cè)設(shè)備中的應(yīng)用。

4.一種轉(zhuǎn)基因玉米檢測(cè)試劑盒，其特征在于：所述試劑盒中含有權(quán)利要求2所述的試劑。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的轉(zhuǎn)基因玉米檢測(cè)試劑盒，其特征在于：所述試劑盒采用權(quán)利要求1所述的檢測(cè)方法對(duì)轉(zhuǎn)基因玉米品系VCO-01981-5進(jìn)行定量檢測(cè)。